tp抗體的測定及臨床意義

1、梅毒螺旋體（蒼白密螺旋體）,梅毒是由梅毒螺旋體引起的一種慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。人體受感染后，螺旋體很快播散到全身，幾乎可侵犯全身各組織與器官，臨床表現(xiàn)多種多樣，且時顯時隱，病程較長。 2005年國家衛(wèi)生部公布,在全國27 種法定報告的 甲、乙類傳染病中,梅毒發(fā)病人數(shù)僅次于肺結(jié)核、乙型肝 炎、細(xì)菌性和阿米巴性痢疾、淋病而高居第五位(2002 年為第七位)。 二. 傳播途徑,一.

2、概況,1、性接觸傳播 占95%。 主要通過性交或其他性行為，如同性戀、接吻等。梅毒密螺旋體大量存在于一、二期梅毒患者的生殖器和其他部位的皮膚粘膜表面，也存在于唾液、精液、乳汁、尿液和血液等體液中。未經(jīng)治療的梅毒患者在感染1～2期內(nèi)最具傳染性。隨著病期延長，傳染性越來越小，4年后通過性接觸無傳染性。,3、胎盤傳播 未經(jīng)治療的梅毒孕婦在整個病程都可經(jīng)胎盤傳播給胎兒。其中在一期或二期患者，血中螺旋體最多。如不治療

3、造成流產(chǎn)或死胎的約為50%，發(fā)生胎傳播梅毒的危險約50%，感染梅毒1年后的胎盤傳播的危險性逐漸降為50%以下。病期超過4年雖通過性接觸無傳染性，但仍可傳給胎兒，病期越長，傳染性越小。,2、輸血傳染,4、產(chǎn)道傳播 新生兒在出生時，頭部、肩部損傷或接觸了母體生殖器都能受母體陰部的螺旋體感染，而引起嬰兒的后天性梅毒。5、其他傳播 哺乳、接觸梅毒患者污染的衣被、毛巾、食具或污染的醫(yī)療器械，都可引起梅毒的間接傳播。,人

4、類對梅毒無先天免疫性，尚無疫苗接種進(jìn)行人工免疫，僅能在受感染后產(chǎn)生感染性免疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染,三、梅毒的免疫性,首先產(chǎn)生IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染2周后即可測出，早期梅毒抗梅治療3～9個月后或晚期梅毒治療2年后，大部分病人IgM可轉(zhuǎn)陰性，再感染時又出現(xiàn)陽性，故IgM型抗體的存在是活動性（現(xiàn)癥）梅毒的表現(xiàn)。感染梅毒4周左右產(chǎn)生IgG型抗梅毒螺旋體抗體，即使經(jīng)足量抗梅治療，梅毒螺旋體抗原消失后很長時間，IgG抗體

5、仍可通過記憶細(xì)胞的作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終生在血清中可測出。,一種是梅毒特異性抗體IgM和IgG,胎兒在宮內(nèi)感染梅毒螺旋體后，胚胎晚期（6～9個月）已能合成IgM型抗體，出生后第3個月開始形成IgG型抗體；IgM抗體不能通過胎盤，而IgG抗體能通過胎盤，如患兒血清中檢側(cè)出19S-IgM抗梅毒螺旋體抗體是診斷先天梅毒的有力證據(jù)一種是非特異性抗體---反應(yīng)素（reagin） 是梅毒螺旋體破壞人體組織過程中釋放出的一種抗原性心磷脂刺激機體

6、所產(chǎn)生的抗體。一般在感染后5～7周（或下疳出現(xiàn)后2～3周）產(chǎn)生。經(jīng)正規(guī)治療后可逐漸消失。,,四. 梅毒的診斷1、病史2、臨床表現(xiàn)3、實驗室檢查。（1）血清學(xué)檢驗(測抗體) （2）病原學(xué)檢查：直接查梅毒螺旋體(暗 視野顯微鏡,直接熒光抗體法)（3）梅毒螺旋體核酸測定。,非特異性類脂質(zhì)抗原血清試驗： 是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原檢查血清中的反應(yīng)素，用于初篩試驗及療效觀察?？梢苑譃橐韵滤姆N試

7、驗，原理基本相同： 1、性病研究實驗室玻片試驗（VDRL) ：由于試劑需現(xiàn)配 現(xiàn)用，故而國內(nèi)實驗室很少采用。但VDRL是唯一可用于神經(jīng)性梅毒診斷的血清學(xué)方法 2、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗 (RPR)：在特制的紙片 上進(jìn)行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現(xiàn) 凝集，用肉眼可觀察結(jié)果。 3、甲苯胺紅試驗（TRUST)：在試劑中加入甲苯胺紅代替炭粉 顆粒，使結(jié)果更易于觀察。

8、 4、不加熱血清反應(yīng)素試驗（USR),梅毒的血清學(xué)試驗,非特異性類脂質(zhì)抗原血清試驗的缺陷： 1、特異性：不高。在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、麻風(fēng)病、靜脈吸毒者以及懷孕婦女中均可出現(xiàn)反應(yīng)素，所以此類試驗有時會出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。用于初篩試驗。 2、敏感性：不高?？贵w過量可引起前帶現(xiàn)象（1-2％二期梅毒病人）；由于感染梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)晚于特異性梅毒螺旋體抗體；晚期梅毒反應(yīng)素又可能轉(zhuǎn)陰--假陰性反應(yīng)，因此這類試驗不適于一

9、、三期梅毒，對隱性梅毒和神經(jīng)梅毒也不敏感。因此此類試驗做梅毒初篩時，存在一定數(shù)量的漏檢非梅毒螺旋體抗原血清試驗的優(yōu)點： 1、非梅毒螺旋體抗原血清試驗表現(xiàn)為滴度隨治療逐漸下降， 故可以作為療效觀察的指標(biāo) 2、此類方法簡便，價格低廉,梅毒的血清學(xué)試驗,梅毒螺旋體抗原血清試驗： 用梅毒螺旋體作為抗原檢測血清中的抗螺旋體IgM和/或IgG抗體，其敏感性和特異性均較高。常用的有以下五種方法： 1、熒光梅

10、毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS)最敏感的方法 技術(shù)操作上也是最困難的，故常不被臨床實驗室作為首選 方法 2、梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA）國內(nèi)使用的商品化 TPHA試劑盒均未通過國家的批批檢3、梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA)確證試驗方法4、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA） 5、梅毒螺旋體快速診斷試驗（TP-RT）

11、未通過國家的批批 檢,梅毒的血清學(xué)試驗,梅毒螺旋體明膠凝集試驗（TPPA IgG） 原理：用超聲裂解的梅毒螺旋體為抗原，致敏惰性明膠顆 粒，此致敏明膠顆粒與人血清或血漿中的梅毒螺旋 體抗體結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可觀察的凝集反應(yīng)。是TPHA 的升級產(chǎn)品。 優(yōu)點： 1、試劑穩(wěn)定，批間差小 2、結(jié)果判讀清晰明確

12、 3、敏感性和特異性高不足：結(jié)果判定主觀，不易保存. 成本較高， 不適合大批量檢測,梅毒的血清學(xué)試驗,Serodia TPPA的操作步驟,6、結(jié)果判讀,5、混勻，加蓋，孵育2個小時,Serodia TPPA的結(jié)果判讀（定性試驗）,梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗（TP-ELISA） 原理：以梅毒螺旋體抗原包被聚丙乙烯板，再加入待檢血清以及酶標(biāo)抗原，形成雙抗原夾心，同時

13、檢測IgG、IgM抗體。少數(shù)試劑采用間接法，檢測IgG 優(yōu)點：1、敏感性和特異性較高 2、價格較低，適合于對大量樣品的篩查 3、可實現(xiàn)操作的自動化、客觀化 不足：各家ELISA試劑盒采用的抗原和工藝不 同，使測定的敏感性和特異性產(chǎn)生較大的 差異，臨床實驗室在選用ELISA試劑前應(yīng)認(rèn) 真進(jìn)行

14、評估. 基因重組抗原,假陰性.,梅毒的血清學(xué)試驗,有研究表明:使用由rTP47,rTP17和rTP15這3種重組表達(dá)相關(guān)抗原包被的ELISA試劑盒,有非常好的敏感性和特異性.ELISA試劑對II期、潛伏期和療后梅毒的特異性和敏感性都較好，但對I期梅毒的敏感性尚有待提高。,樣品對ELISA及PA檢測結(jié)果的影響,敏感性和特異性ELISA比TPPA法稍差。13736份標(biāo)本TPPA法 陽性214RPR法 陽性192(1

15、8例確診假陽性 22例假陰性)ELISA法 陽性204(4例假陽性),無償獻(xiàn)血者(18～55歲)中, ELISA法為0.58%。 其中51～55歲陽性率達(dá)2.14 ( 9 /421)無臨床癥狀，只有抗體陽性。陽性結(jié)果難以用正在或曾經(jīng)感染梅毒解釋。,普通人群：陽性率> 1.5% ( 1.52% ～1.61% ) 。

16、其中> 50歲 53.3% ～62.3% 71～80歲 27.7% ～27.9%。,ELISA或TPPA法假陽性（老年人）,梅毒螺旋體抗體試驗所測為抗T. pa llidum的IgG/ IgM類抗體。試驗中所用抗原FTA2ABS：T. pallidum subsp pallidum 的Nichols株凍干懸液TPPA：Nichols株超聲處理EL ISA：純化的/基因重組的分子量(MW)

17、47 000、45500、17000、15500的T. pa llidum特異抗原,梅毒血清學(xué)試驗的假陽性生物學(xué)基礎(chǔ),人類共生的螺旋體很多，雖然有些螺旋體可能不致病,但可能參與齒齦類、牙周病、腹瀉等的發(fā)病。已發(fā)現(xiàn)抗T. pallidum MW 37 000的鞭毛鞘蛋白的單克隆抗體和抗MW47 000脂蛋白的單克隆抗體可與某些口腔螺旋體反 應(yīng)。齒齦炎和牙周病患者常產(chǎn)生抗梅毒螺旋體( T.pallidum subsp. pallidum )

18、MW 47 000、37 000、14 000和12 000抗原的IgG類抗體。甚至少部分健康人也可測出抗MW 47 000和37 000抗原的抗體。,,如何解決假陽性問題？,進(jìn)行梅毒螺旋體血清學(xué)試驗時，待測血清預(yù)先用非致病性密螺旋體T. phageden is的Reiter株 提取物吸收（或陽性標(biāo)本進(jìn)行吸收試驗。即使如此,試驗的特異性仍只能達(dá)99%左右,不能絕對排除假陽性,關(guān)于梅毒血清學(xué)試驗程序的探討（一）,先以非梅毒螺旋體抗原血清

19、試驗（RPR、TRUST等）進(jìn)行初篩，再以梅毒螺旋體抗原血清試驗（TPPA、TPHA、ELISA等）進(jìn)行確認(rèn)。 優(yōu)點：非梅毒螺旋體抗原血清試驗價格低廉，使 梅毒檢測的成本可以保持在低水平 缺點：非梅毒螺旋體抗原血清試驗的敏感性較 差，導(dǎo)致臨床上易出現(xiàn)漏檢的情況。,先進(jìn)行梅毒螺旋體抗原血清試驗，陽性時再進(jìn)行非梅毒螺旋體抗原血清試驗。,關(guān)于梅毒血清