抗髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體測定方法建立及臨床意義.pdf

1、目的： 采用分子克隆技術制備高純度的髓鞘少突膠質(zhì)細胞糖蛋白(myelin oligodendroglia glycoprotein， MOG)；建立以放射免疫分析技術(radioimmunoassay，RIA)測定血清抗MOG抗體的新方法；初步探討抗MOG抗體與MS診斷的相關性。 方法： 1、采用分子克隆技術誘導表達MOGIgd融合蛋白，并通過金屬螯合親和層析法進行純化。 2、建立測定血清抗MOG抗體的R

2、IA方法，并應用于動物實驗。以Iodogen為氧化劑，使用Na125I標記MOGIgd融合蛋白，經(jīng)Sephadex-G25凝膠層析過濾，獲得高純度的125I-MOGIgd融合蛋白。將48只C57BL/6小鼠隨機分為4組。MOG組：用MOGIgd融合蛋白與完全弗氏佐劑(CFA)的混合抗原乳劑免疫小鼠；TrxA組：用硫氧還蛋白(TrxA)與CFA的混合乳劑免疫小鼠；GPSCH組：用豚鼠脊髓勻漿(GPSCH)和CFA的混合乳劑免疫小鼠；NC組

3、：用生理鹽水和CFA的混合乳劑免疫小鼠。雙盲法觀察小鼠，并記錄神經(jīng)功能評分。各組動物觀察30天后處死，同時采集小鼠血清標本。將125I-_MOGIgd融合蛋白與各組小鼠血清標本結(jié)合，孵育過夜后與兔抗鼠IgG結(jié)合，收集沉淀，用γ放射性檢測儀測定抗MOG抗體水平。 3、測定分析患者血清抗MOG抗體水平。收集23例MS(MS組)、57例臨床孤立綜合征(CIS組)、41例其他炎癥性神經(jīng)系統(tǒng)疾病(OIND組)及37例非炎癥性神經(jīng)系統(tǒng)疾病(

4、ONND組)患者的血清和腦脊液。將125I-MPGIgd融合蛋白與各組患者血清和腦脊液結(jié)合，孵育過夜后與羊抗人IgG結(jié)合，收集沉淀后用γ放射性檢測儀測定抗MOG抗體水平。應用Image pro plus6.0軟件測定中樞神經(jīng)脫髓鞘患者(包括MS組和CIS組)MRI資料的病灶負荷(BOD)，然后與患者血清中抗MOG抗體水平作相關性分析。應用單向免疫擴散方法檢測各組患者血清和腦脊液的IgG和白蛋白濃度，并計算腦脊液IgG指數(shù)(IgG ind

5、ex)、24小時IgG合成率(IgG-syn)及白蛋白商(Qalb)。通過繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線)，比較血清抗MOG抗體水平、腦脊液IgG index、IgG-syn及Qalb等參數(shù)對MS診斷的敏感性和特異性。 結(jié)果： 1)經(jīng)分子克隆技術誘導表達純化后，獲得分子量為32KD的MOGIgd融合蛋白，最終蛋白濃度為2.91mg/ml。 2)成功制備純度較高的125I-MOGIgd融合蛋白，標記率為48.4

6、％，比放射性為320043 Bq/μg。應用新型放射免疫法測定各組小鼠血清抗MOG抗體，MOG組血清抗MOG抗體水平(4886±381)cpm高于GPSCH組(2071±384)cpm、TrxA組(4391±167)cpm及正常對照組(1747±215)cpm(P<0.01)。 3)MS組患者血清中抗MOG抗體的水平(3324±574)cpm明顯高于與CIS組(2913±570)cpm、OIND組(2651±383)cpm和ON

7、ND組(2678±430)cpm，統(tǒng)計學有顯著差異(P<0.01)。MS組患者血清抗MOG抗體陽性率(47.8％)明顯高于其他組別，CIS組(17.85％)、OIND組(9.8％)及ONND組(2.7％)。MS組活動期血清抗MOG抗體的水平及陽性率高于緩解期期，且有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。中樞脫髓鞘病交(MS和CIS)患者MRI顯示的病灶負荷(BOD)與其血清抗MOG抗體水平呈正相關(P<0.01)?？筂OG抗體的ROC曲線下面積(