伯勞特-培訓資料hp

1、幽門螺桿菌免疫印跡試劑盒,簡要介紹及實驗操作過程,幽門螺桿菌免疫印跡試劑盒,簡要介紹及實驗操作過程,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,醫(yī)療器械注冊證,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,醫(yī)療器械產(chǎn)品生產(chǎn)制造認可表,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,生物制品檢定報告書,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,前　言,20世紀醫(yī)學界的一個重要事件，一個醫(yī)學工作者懷疑和尋求了一個多世紀的微生物——幽門螺

2、桿菌終于被發(fā)現(xiàn)了！幽門螺桿菌的發(fā)現(xiàn)和分離培養(yǎng)成功是科學敏銳性和勤奮、幸運相結(jié)合的結(jié)果。這一事件成為胃腸病研究史上的一次革命，一個里程碑。從此以后，胃腸病學進入了一個新紀元。,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,幽門螺桿菌的發(fā)現(xiàn),幽門螺桿菌（Helicobacter pylori,簡稱HP）HP是一種需氧菌，弧形、革蘭氏陰性菌，菌體寬0.5～1.0um，長2.5～4.0um，有4～7條鞭毛。是1983年由Barry Marsha

3、ll和Rodin Warrem在澳大利亞首先分離出來的。大量臨床研究證明：HP感染是慢性胃炎、胃十二指腸潰瘍和胃癌的重要致病因素，1994年世界衛(wèi)生組織（WHO）已將其列為第一類（即肯定）的生物致癌因子。,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,在臨床上HP可分為兩種類型：Ⅰ型,為產(chǎn)細胞毒素HP菌株，其檢出率約占總HP的50％～60％，應用免疫印跡技術(shù)，顯示其免疫活性蛋白區(qū)帶有128、116、110、95、91、66、60、5

4、4、50、33和30KD等。其中細胞毒（Cag A）蛋白與128、116和110KD區(qū)帶有關(guān)，空泡毒素(Vac A)蛋白與95和91KD區(qū)帶有關(guān)，尿素酶蛋白與66、60、33和30KD區(qū)帶有關(guān)，鞭毛蛋白與54和50KD區(qū)帶有關(guān)。這類菌株能使胃上皮細胞出現(xiàn)空泡、變形和損害，易引起潰瘍和誘發(fā)癌變。Ⅱ型，是不產(chǎn)生細胞毒素的HP，即Cag A(-)和Vac A(-)株，這一類HP菌株毒性較小，感染后一般只是引起慢性淺表性胃炎而無臨床癥狀。

5、世界上超過半數(shù)的人感染HP，但并不是所有的HP都產(chǎn)生空泡毒素，只有50%—60%具有空泡毒素活性的HP才是產(chǎn)毒菌株。因此對指導HP感染的治療具有重要的意義。,HP分型的意義,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,HP與慢性胃炎的關(guān)系,HP與慢性胃炎的關(guān)系,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,HP的致病作用,HP感染與胃、十二指腸潰瘍之間有密切關(guān)系,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,胃癌與萎縮性胃炎和腸上皮

6、化生有密切關(guān)系，這種病理學變化一直認為是癌前病變。 Eurogast研究小組認為，100%伴有HP感染的人群中胃癌的危險性比無HP感染的人群增加近6倍。 1994年，世界衛(wèi)生組織（WHO）已將HP列為第一類生物致癌因子。,HP的致病作用,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,臨床常用HP檢測方法比較,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,免疫印跡簡介 印跡技術(shù)是本世紀分子生物學領(lǐng)域三大發(fā)現(xiàn)之

7、一。它與內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)和PCR基因擴增技術(shù)，給人類生物工程帶來了革命性進展。它的基本原理是將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合起來，主要有三個工序： 將蛋白質(zhì)經(jīng)凝膠電泳按分子量大小不同依次分離； 將分離的組分轉(zhuǎn)印到印跡膜上； 對轉(zhuǎn)印到印跡膜的蛋白成分進行免疫學檢測。,免疫印跡簡介,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,HP抗體免疫印跡檢測之基本原理 本試驗是將標準的HP產(chǎn)毒株【CagA(+)和VacA(+)】的各種抗原成分提取

8、出來，用聚丙烯酰胺凝膠電泳按分子量大小不同依次分開，再將其轉(zhuǎn)印至印跡膜上，如果被檢者血清有相應抗體，應用酶聯(lián)免疫反應，就會在抗原的相應位置出現(xiàn)顯色區(qū)帶，據(jù)此可判斷出被檢血清中各種HP抗體。根據(jù)抗體的不同可推斷HP類型，根據(jù)顯色帶的強弱、消長可觀察治療效果，預測潰瘍有無復發(fā)的可能性。,HP免疫印跡檢測的基本原理,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,各種胃、十二指腸疾?。喊ㄎ浮⑹改c潰瘍、慢性胃炎、胃癌和胃淋巴瘤等；非潰瘍性

9、消化不良；缺鐵性貧血口服鐵劑治療效果不佳者；兒童消化不良或不明原因的生長發(fā)育遲緩者。,適應癥,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,本檢查無任何禁忌癥，不需要空腹可隨進采血檢測。,禁忌癥,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,本檢查安全可靠，無任何副作用，尤其適用于兒童、孕婦HP感染的檢測。,實驗安全性,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,HP抗體免疫印跡試劑盒特點,非創(chuàng)傷性HP檢測技術(shù)；

10、 能直接觀察HP血清學反應全貌，包括了CagA、VacA和尿素酶亞單位；國際上公認的HP標準株和質(zhì)控血清確保了檢測的可靠性；方法簡單，不需任何輔助設備；檢測快速，整個時間僅需2小時；標本需要量少，僅需10微升被檢血清；特異性強（96.0%）；敏感性高（98.4%）。,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,試劑盒組成（按40人份計）,,濃縮洗滌液

11、 2×25ml酶聯(lián)試劑 0.5ml顯色劑A液 25ml顯色劑B液 25ml終止液 25ml印跡薄膜(置反應槽內(nèi)) 5

12、5;8條說明書(含《標準帶》) 一份,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,幽門螺桿菌試劑盒的操作步驟,實驗要準備的材料：蒸餾水若干；1000ul可調(diào)加樣槍一支、10ul加樣槍一支及相應的加樣槍吸嘴若干；500ml量杯一個、500ml量筒一個；搖床或溫箱一臺；廢物桶一個等。,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,1 在量杯中將濃縮洗滌液用蒸餾水按 1：10 的比例稀釋成洗滌應用液

13、。 2 每槽加入洗滌應用液1ml， 再加入待測血清或全血10ul， 放在搖床上搖動30分鐘。（或搖動混勻1分鐘后，置37℃溫箱中孵育30分鐘） 3 取出反應槽，棄去槽中液體，并在平鋪的紙巾上將其倒置經(jīng)磕以拍干剩余液體，每槽加入洗滌液1ml，搖動洗滌1分鐘，棄去槽中液體，并在平鋪的紙巾上將其倒置經(jīng)磕以拍干剩余液體，重復洗滌3—4次；,幽門螺桿菌試劑盒的操作步驟,幽門螺桿菌試劑盒的操作步驟,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品

14、公司,4 每槽加入洗滌應用液500ul，再加入酶聯(lián)試劑10ul，放在搖床上搖動30分鐘。（或搖動混勻1分鐘后，置37℃溫箱中孵育30分鐘） 5 同（ 3 ）洗滌。 6 加入顯色劑 A 和 B 各0.5ml， 5—10分鐘觀察結(jié)果。 7 待陽性帶顯色清晰，即加終止液0.5ml，2分鐘后棄去液體，用自來水沖洗后取出印跡膜，等干后對比《標準帶》判斷結(jié)果。,幽門螺桿菌試劑盒的操作步驟,2024/3/21,深圳市伯勞特生物制品公司,