口蹄疫病毒3C蛋白降解蛋白激酶PKR促進病毒復(fù)制的分子機制.pdf

1、口蹄疫是口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV)引起的對家畜及多種野生動物高度致病的烈性傳染病。天然免疫反應(yīng)在宿主抵御FMDV早期感染過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，是宿主抵御病毒感染的第一道防線，廣譜、及時地識別病原微生物感染并啟動機體的免疫反應(yīng);同時天然免疫也能誘導(dǎo)機體起始適應(yīng)性免疫應(yīng)答，并對適應(yīng)性免疫反應(yīng)具有關(guān)鍵地調(diào)控作用。
　　雙鏈RNA依賴的蛋白激酶(PKR)在宿主抵抗病毒感染中發(fā)揮著重要的

2、作用。為了闡明PKR在FMDV感染過程中的作用，我們首先開展了PKR的過表達實驗，結(jié)果表明過表達PKR，F(xiàn)MDV的復(fù)制水平明顯受到抑制;這證明PKR具有抑制FMDV復(fù)制的功能。我們進一步對FMDV感染后PKR在細胞水平內(nèi)表達情況進行了研究，結(jié)果表明，F(xiàn)MDV感染PK15細胞后，PKR的轉(zhuǎn)錄水平逐漸升高，但其蛋白水平及磷酸化水平則顯著降低;PKR介導(dǎo)激活的eIF2α磷酸化水平也受到明顯的抑制。通過進一步研究，發(fā)現(xiàn)FMDV非結(jié)構(gòu)蛋白3Cpr

3、o是FMDV感染細胞后抑制PKR表達降低其磷酸化的關(guān)鍵病毒蛋白。為了闡明3Cpro下調(diào)PKR蛋白表達的機制，我們通過蛋白質(zhì)的互作、構(gòu)建突變體、蛋白質(zhì)降解途徑抑制等方法進行了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明FMDV3CPro不能與宿主PKR發(fā)生互作，其水解酶活性與PKR表達水平的降低并不存在關(guān)聯(lián)，3Cpro是通過溶酶體途徑來下調(diào)PKR的表達;但對于其具體如何調(diào)控溶酶體路徑的機制還有待于進一步闡明。
　　總之，通過本研究的開展，我們證實了宿主PKR