實(shí)驗(yàn)八 果蔬中維生素c的提取和定量測定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)

1、1實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)八果蔬中維生素果蔬中維生素C的提取和定量測定（的提取和定量測定（26二氯酚靛酚滴定二氯酚靛酚滴定法）法）【原理原理】1.學(xué)習(xí)并掌握定量測定維生素C的原理和方法。2.了解蔬菜、水果中維生素C含量情況。維生素C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺少它時(shí)會(huì)產(chǎn)生壞血病，因此又稱為抗壞血酸（bicacid）。它對(duì)物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)具有重要的作用。近年來，發(fā)現(xiàn)它還有增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤的抵抗力，并具有化學(xué)致癌物的阻斷作用。維生素C是不飽和多羥基物，

2、屬于水溶性維生素。它分布很廣，許多水果、蔬菜中的含量更為豐富。維生素C具有很強(qiáng)的還原性。還原型抗壞血酸能還原染料26二氯酚靛酚（DCIP），本身則氧化為脫氫型。在酸性溶液中，26二氯酚靛酚呈紅色，還原后變?yōu)闊o色。因此，當(dāng)用此染料滴定含有維生素C的酸性溶液時(shí)，維生素C尚未全部被氧化前，則滴下的染料立即被還原成無色。一旦溶液中的維生素C已全部被氧化時(shí)，則滴下的染料立即使溶液變成粉紅色。所以，當(dāng)溶液從無色變成微紅色時(shí)即表示溶液中的維生素C剛剛

3、全部被氧化，此時(shí)即為滴定終點(diǎn)。如無其它雜質(zhì)干擾，樣品提取液所還原的標(biāo)準(zhǔn)染料量與樣品中所含還原型抗壞血酸量成正比。【試劑和器材試劑和器材】一、試劑一、試劑2%草酸溶液:草酸2g溶于100mL蒸餾水中。1%草酸溶液:草酸1g溶于100mL蒸餾水中。標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液（1mgmL）:準(zhǔn)確稱取100mg純抗壞血酸（應(yīng)為潔白色，如變?yōu)辄S色則不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀釋至100mL，貯于棕色瓶中，冷藏。最好臨用前配制。0.1%26二氯酚靛酚溶液

4、:250mg26二氯酚靛酚溶于150mL含有52mgNaHCO3的熱水中，冷卻后加水稀釋至250mL，貯于棕色瓶中冷藏（4℃）約可保存一周。每次臨用時(shí)，以標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液標(biāo)定。二、材料：二、材料：水果、蔬菜三、器材三、器材研缽，組織勻漿器，吸量管，抽濾設(shè)備，離心機(jī)，濾紙，容量瓶，滴定管，錐形瓶。【操作方法操作方法】3【思考題思考題】1為了測得準(zhǔn)確的維生素C含量，實(shí)驗(yàn)過程中都應(yīng)注意哪些操作步驟？為什么？2試簡述維生素C的生理意義?！拘≠Y料

5、小資料】一、維生素一、維生素C維生素C是人類膳食中必需的維生素之一，如果缺乏維生素C，將導(dǎo)致壞血病發(fā)生。因此，維生素C又稱為抗壞血酸，有防治壞血病的功效?？箟难嵩谧匀唤绶植际謴V泛，存在于新鮮水果和蔬菜中，尤其是檸檬果實(shí)和一些綠色植物（如青辣椒、菠菜等）中含量特別豐富?？箟难嵩跈C(jī)體同具有廣泛的生理功能，已知體內(nèi)許多重要物質(zhì)的代謝反應(yīng)都需要抗壞血酸的參與。它是脯氨酸羥基化酶的輔酶，故有增進(jìn)膠原蛋白合成的作用。機(jī)體中許多含疏基的酶，需要

6、依賴于作為還原劑的抗壞血酸的保護(hù)，使酶分子的疏基處于還原狀態(tài)，從而維持其催化活性。由于抗壞血酸的氧化還原作用，它可促進(jìn)免疫球蛋白的合成，增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力。同時(shí)還能使氧化型谷胱甘肽轉(zhuǎn)化為還原型谷胱甘肽（簡稱GSH），而GSH可與重金屬結(jié)合而排出體外，因此維生素C常用于重金屬的解毒。此外，抗壞血酸尚有許多其他生理功能，但其作用機(jī)理還不十分清楚。抗壞血酸是一種不飽和的多羥基內(nèi)酯化合物，稍有酸味的糖類白色晶體，易溶于水，故屬于水溶性維生素。在溶

7、液中其分子內(nèi)C2和C3之間的烯醇式羥基上的氫極易解離并釋放出H，而被氧化成脫氫抗壞血酸，氧化后仍具有維生素C的生理活性，但它易分解為二酮古洛糖酸，此化合物不再具有維生素C的生理活性。維生素C有很強(qiáng)的還原性，在堿性溶液中加熱并有氧化劑存在時(shí)，易被氧化而破壞。還原型和氧化型抗壞血酸可以互相轉(zhuǎn)變，在生物組織中自成一氧化還原系統(tǒng)。由于維生素在營養(yǎng)學(xué)和臨床方面的重要意義，故對(duì)食物和生物材料中維生素含量的測定是十分必須的?？箟难岬亩繙y定方法很多

8、，有26—二氯酚靛酚（簡稱DCIP）滴定法、碘滴定法、24—二硝基苯肼法、Folin試劑比色法、紫外吸收法等。其中廣泛采用的是DCIP滴定法，它具有簡便、快速、比較準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適用于許多不同類型樣品的分析。缺點(diǎn)是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的含量，易受其他還原物質(zhì)的干擾。如果樣品中含有色素類物質(zhì)，將給滴定終點(diǎn)的觀察造成困難。在酸性環(huán)境中，抗壞血酸（還原型）能將染料26—DCIP還原成無色的還原型26—DCIP，而抗壞血

9、酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。氧化型26—DCIP在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色，但在酸性溶液中則呈粉紅色。因此，當(dāng)用26—DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時(shí)，在抗壞血酸未被全部氧化前，滴下的26—DCIP立即被還原成無色，一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時(shí)，則滴下微量過剩的26—DCIP便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色，此時(shí)即為滴定終點(diǎn)，表示溶液中的抗壞血酸剛剛?cè)勘谎趸Ｒ罁?jù)滴定時(shí)26—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量(ml)，可以計(jì)算出被測樣品中抗

10、壞血酸的含量。氧化型26—DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進(jìn)行反應(yīng)。即先將樣品溶于一定濃度的酸性溶液中或經(jīng)抽提后，再用26—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)。食物和生物材料中常含有其他還原物質(zhì)，其中有些還原物質(zhì)可使26—DCIP還原脫色。為了消除這些還原物質(zhì)對(duì)定量測定的干擾，可用抗壞血酸氧化酶處理，破壞樣品中還原型抗壞血酸后，再用26—DCIP滴定樣品中其他還原物質(zhì)。然后從滴定未經(jīng)酶處理樣品時(shí)26—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的總消耗量中

11、，減去滴定非抗壞血酸還原物質(zhì)26—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量，即為滴定抗壞血酸實(shí)際所消耗的26—DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，由此可以計(jì)算出樣品中抗壞血酸的含量。另外，還可利用抗壞血酸和其他還原物質(zhì)與26—DCIP反應(yīng)速度的差別，并通過控制樣品溶液在pH1—3范圍內(nèi)，進(jìn)行快速滴定，可以消除或減少其他還原物質(zhì)的作用，一般在這樣的條件下，干擾物質(zhì)與26—DCIP的反應(yīng)是很慢的或受到抑制。生物體液（如血液、尿等）中的抗壞血酸的測定比較困難，因?yàn)檫@些樣