多糖的提取分離方法

1、1.多糖的提取方法多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、動物多糖3大類。多糖的提取首先要根據(jù)多糖的存在形式及提取部位，決定在提取之前是否做預(yù)處理。動物多糖和微生物多糖多有脂質(zhì)包圍，一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚的混合液進(jìn)行回流脫脂，釋放多糖。植物多糖提取時需注意一些含脂較高的根、莖、葉、花、果及種子類，在提取前，應(yīng)先用低極性的有機(jī)溶劑對原料進(jìn)行脫脂預(yù)處理，目前多糖的提取方法主要有溶劑提取法、生物提取法、強(qiáng)化提取法

2、等。11溶劑法溶劑法111水提醇沉法水提醇沉法是提取多糖最常用的一種方法。多糖是極性大分子化合物，提取時應(yīng)選擇水、醇等極性強(qiáng)的溶劑。用水作溶劑來提取多糖時，可以用熱水浸煮提取，也可以用冷水浸提滲濾，然后將提取液濃縮后，在濃縮液中加乙醇，使其最終體積分?jǐn)?shù)達(dá)到70%左右，利用多糖不溶于乙醇的性質(zhì)，使多糖從提取液中沉淀出來，室溫靜置5h，多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和得率均較高。影響多糖提取率的因素有：水的用量、提取溫度、浸提固液比、提取時間以及提取次數(shù)等

3、。水提醇沉法提取多糖不需特殊設(shè)備，生產(chǎn)工藝成本低，安全，適合工業(yè)化大生產(chǎn)，是一種可取的提取方法。但由于水的極性大，容易把蛋白質(zhì)、苷類等水溶性的成分浸提出來，從而使提取液存放時腐敗變質(zhì)，為后續(xù)的分離帶來困難，且該法提取比較耗時，提取率也不高。112酸提法為了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基礎(chǔ)上發(fā)展了酸提取法。如某些含葡萄糖醛酸等酸性基團(tuán)的多糖在較低pH值下難以溶解，可用乙酸或鹽酸使提取液成酸性，再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入銅鹽等生成

4、不溶性絡(luò)合物或鹽類沉淀而析出。由于H＋的存在抑制了酸性雜質(zhì)的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖產(chǎn)品純度相對較高，但在酸性條件下可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂，且酸會對容器造成腐蝕，除弱酸外，一般不宜采用。因此酸提法也存在一定的不足之處。113堿提法多糖在堿性溶液中穩(wěn)定，堿有利于酸性多糖的浸出，可提高多糖的收率，縮短提取時間，但提取液中含有其它雜質(zhì)，使粘度過大，過濾困難，且浸提液有較濃的堿味，溶液顏色呈黃色，這樣會影響成品的風(fēng)味和色澤。114超臨

5、界流體萃取法超臨界流體萃取技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新的提取分離技術(shù)。超臨界流體是指物質(zhì)處于臨界溫度和臨界壓力以上時的狀態(tài)，這種流體兼有液體和氣體的特點(diǎn)，密度大，粘稠度小，有極高的溶解，滲透到提取材料的基質(zhì)中，發(fā)揮非常有效的萃取功能。而且這種溶解能力隨著壓力的升高而增大，提取結(jié)束后，再通過減壓將其釋放出來，具有保持有效成分的活性和無溶劑殘留等優(yōu)點(diǎn)。由于CO2的超臨界條件（TC＝3046℃，Tp＝738MPa）容易達(dá)到，常用于超臨界萃取的

6、溶劑，在壓力為8～40MPa時的超臨界CO2足以溶解任何非極性、中極性化合物，在加入改性劑后則可溶解極性化物。該法的缺點(diǎn)是設(shè)備復(fù)雜，運(yùn)行成本高，提取范圍有限。12酶解法酶解法121單一酶解法單一酶解法指的是使用一種酶來提取多糖，從而提高提取率的生物技術(shù)。其中經(jīng)常使用的酶有蛋白酶、纖維素酶等。蛋白酶對植物細(xì)胞中游離的蛋白質(zhì)具有分解作用，使其結(jié)高，但溶劑沸點(diǎn)低，易揮發(fā)，不宜大量應(yīng)用。213三氯乙酸法三氯乙酸是一種有機(jī)酸，使多糖提取液中的蛋白

7、質(zhì)與有機(jī)酸作用而變性沉淀。該法是在多糖水提液中滴加5%～10%與多糖水提取液等體積的三氯乙酸，混勻靜置過夜，離心除去膠狀沉淀，重復(fù)以上的操作直至溶液不再繼續(xù)混濁為止，得無蛋白質(zhì)的多糖。三氯乙酸濃度越大，除蛋白質(zhì)效果越好，但對多糖的影響也越大，可能是三氯乙酸對多糖結(jié)構(gòu)具有破壞作用，使多糖降解，而且這種破壞作用隨著三氯乙酸濃度增大而增強(qiáng)。植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白質(zhì)，也可先用蛋白水解酶，使樣品中的蛋白質(zhì)部分降解后再用Sevag法效果更好

8、；微生物多糖去除蛋白常采用Sevag法、三氟三氯乙烷法；也可用鹽析法、有機(jī)溶劑萃取等方法除蛋白。22多糖的分離多糖的分離主要有分級沉淀、季銨鹽沉淀法、金屬鹽沉淀法、色譜分離、膜分離、透析、電滲析等，目前大多采用DEAE－凝膠或其他各種不同類型的凝膠柱層析以及離子交換色譜法。221分級沉淀法大多數(shù)活性多糖可溶于水，3個碳以下的多糖還可溶于乙醇，隨著聚合度的增大，多糖在乙醇中的溶解度逐漸降低。根據(jù)這一性質(zhì)可在多糖的濃縮水溶液中分批加入乙醇，

9、使乙醇的體積濃度逐漸增加到50，100，200，900mLL，從而使不同聚合度的多糖分別沉淀析出。222色譜分離法常用兩種色譜分離方法：一是凝膠柱色譜法，二是離子交換色譜法。223膜分離法膜分離技術(shù)（membraneseparationtechnology，MST）是一種高效分離技術(shù)，分離過程以選擇透過性膜作為分離介質(zhì)，通過在膜兩側(cè)施加某種推動力（壓力差、化學(xué)位差、電位差等），使原料液中組分有選擇性的通過膜。目前應(yīng)用較多的是超濾和微濾技

10、術(shù)。3多糖的分析鑒定多糖的分析鑒定31含量的測定含量的測定測定方法：硫酸－苯酚法、硫酸－蒽酮法、比色定量法、分光光度法、紙色譜法、離子交換色譜法、yaphe法、薄層色譜法、酶法、原子吸收法、HPLC法、凝膠電泳法、親和電泳法、連續(xù)流動分析法檢測法[44]、次亞碘酸鹽定量法、蒽酮－硫酸法（總糖）、DNS法（還原法）、磷鉬比色法、鄰鉀苯胺比色法等。每種方法只對某些多糖的測量效果好。比色法、分光光度法、離子交換色譜法、酶法和電泳法等可同時用于

11、多糖的定性定量分析。32純度鑒定純度鑒定多糖是高分子化合物，其純品微觀上是不均一的，通常所說的多糖純品實(shí)質(zhì)上是一定分子量范圍的均一組分。多糖純度鑒定的常用方法：超離心、高壓電泳、凝膠層析、HLPC法等?，F(xiàn)在應(yīng)用較多的是HLPC法，旋光度測定也是純度測定的一種方法。33分子量的測定分子量的測定多糖分子量的測定是研究多糖性質(zhì)的一項(xiàng)重要工作。常用方法：滲透壓法、蒸氣壓滲透劑法、端基法、粘度法、光散射法、凝膠色譜法、超過率法、沉淀法、凝膠電泳法