實(shí)驗(yàn)九 動物組織中核酸的提取和鑒定

1、實(shí)驗(yàn)七實(shí)驗(yàn)七動物組織中核酸的提取和鑒定動物組織中核酸的提取和鑒定【原理】動物組織細(xì)胞中的核糖核酸動物組織細(xì)胞中的核糖核酸(RNA)(RNA)與脫氧核糖孩酸與脫氧核糖孩酸(DNA)(DNA)大部分與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。核蛋白可被三氯醋酸沉大部分與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用淀，再用9595％乙醇加熱可以除去附著在沉淀上的脂類雜質(zhì)，然后用％乙醇加熱可以除去附著在沉淀上的脂類雜質(zhì)，然后用1010％NaClNaCl溶液提

2、取出核酸的鈉鹽，加入醇可使核溶液提取出核酸的鈉鹽，加入醇可使核酸鈉沉淀析出。酸鈉沉淀析出。先用水由動物肝中提出核蛋白，再籍酚將核酸與蛋白質(zhì)之間的結(jié)合鍵斷裂，并用乙醚抽提去蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)，先用水由動物肝中提出核蛋白，再籍酚將核酸與蛋白質(zhì)之間的結(jié)合鍵斷裂，并用乙醚抽提去蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)，最后用乙醇將核酸沉淀。最后用乙醇將核酸沉淀。核酸核酸(RNA(RNA、DNA)DNA)可被硫酸水解產(chǎn)生磷酸。有機(jī)堿（嘌嶺、嘧啶）和戊糖（核糖、脫氧核糖）可

3、被硫酸水解產(chǎn)生磷酸。有機(jī)堿（嘌嶺、嘧啶）和戊糖（核糖、脫氧核糖）。此三類化合物可用下列方法鑒定之。此三類化合物可用下列方法鑒定之。1、磷酸：能與鉬酸試劑作用生成磷鉬酸，后者在還原劑的作用下。還原成蘭色的鉬蘭。常用的還原劑有氨基苯、磷酸：能與鉬酸試劑作用生成磷鉬酸，后者在還原劑的作用下。還原成蘭色的鉬蘭。常用的還原劑有氨基苯磺酸、氯化亞錫，維生素磺酸、氯化亞錫，維生素C等。等。H3POPO4＋12H12H2MoOMoO4→H→H3POPO

4、412MoO12MoO312H12H2OH3POPO412MoO12MoO3H3POPO46MoO6MoO33Mo3Mo2O52、嘌呤堿：能與苦、嘌呤堿：能與苦味酸作用形成針狀結(jié)晶味酸作用形成針狀結(jié)晶3、戊糖：、戊糖：(1)(1)核糖：經(jīng)與強(qiáng)酸核糖：經(jīng)與強(qiáng)酸(鹽酸與硫酸鹽酸與硫酸)共熱生成糠共熱生成糠醛，后者可與醛，后者可與3535二羥甲二羥甲基苯縮合成綠色化合物?；娇s合成綠色化合物。(2)(2)脫氧核糖：在強(qiáng)脫氧核糖：在強(qiáng)酸中加熱，

5、可生成酸中加熱，可生成ω—羥基γ—酮基戊醛，后者再酮基戊醛，后者再與二苯胺作用生成一藍(lán)色與二苯胺作用生成一藍(lán)色化合物。化合物。上述二反應(yīng)如下上述二反應(yīng)如下【操作】(一)核酸提取核酸提取3、核糖的鑒定：、核糖的鑒定：取中試管取中試管2支，標(biāo)號，按下表操作：支，標(biāo)號，按下表操作：管號試劑核酸水解液核酸水解液5%5%硫酸硫酸拜耳氏試劑拜耳氏試劑1（測定管）（測定管）6滴—9滴2（對照管）（對照管）—6滴9滴搖勻，于沸水浴加熱搖勻，于沸水浴加熱

6、1010分鐘后觀察色顏色之變化。分鐘后觀察色顏色之變化。4、磷酸的鑒定、磷酸的鑒定取中試管二支，標(biāo)號、按下表操作：取中試管二支，標(biāo)號、按下表操作：管號試劑核酸水解液核酸水解液5%5%硫酸硫酸鉬酸試劑鉬酸試劑3%3%維生素維生素C1（測定管）（測定管）1010滴—5滴4滴2（對照管）（對照管）—1010滴5滴4滴搖勻，于沸水浴中搖勻，于沸水浴中2～3分鐘后，觀察二管顏色之變化。分鐘后，觀察二管顏色之變化。【試劑配法試劑配法】1、飽和苦味酸

7、溶液：稱取、飽和苦味酸溶液：稱取1.31.3克的苦味酸，溶于克的苦味酸，溶于100ml100ml的蒸餾水中，靜置過夜。臨用前倒取上層液。的蒸餾水中，靜置過夜。臨用前倒取上層液。2、鉬酸試劑，稱取鉬酸銨、鉬酸試劑，稱取鉬酸銨5克，溶于克，溶于100ml100ml蒸餾水中，再加入濃硫硫蒸餾水中，再加入濃硫硫15ml15ml待冷卻后加蒸餾水至待冷卻后加蒸餾水至1000ml1000ml，此試，此試劑可置陰涼處保質(zhì)一月。劑可置陰涼處保質(zhì)一月。3、

8、拜耳（、拜耳（BialBial）氏試劑：稱取）氏試劑：稱取1.51.5克3，5一二羥甲苯，加入濃鹽酸一二羥甲苯，加入濃鹽酸50ml50ml。再加。再加1010％三氯化鐵％三氯化鐵2020—3030滴，貯于滴，貯于冰箱。此試劑應(yīng)在臨用前配制。冰箱。此試劑應(yīng)在臨用前配制。4、二苯胺試劑：稱取純二苯胺、二苯胺試劑：稱取純二苯胺lglg溶于溶于1000ml1000ml的冰醋酸中，加入濃硫酸的冰醋酸中，加入濃硫酸2.75ml2.75ml，貯于棕色

9、瓶中，此試劑亦需臨，貯于棕色瓶中，此試劑亦需臨用前配制。用前配制。5、3％維生素％維生素C：稱取維生素：稱取維生素C3克溶于克溶于5％三氯醋酸％三氯醋酸100ml100ml中（已氧化變質(zhì)的維生素中（已氧化變質(zhì)的維生素C不能用）不能用）。【注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)】1、在用飽和、在用飽和NaHCONaHCO3調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pHpH值時(shí)，一定用試紙測定，將值時(shí)，一定用試紙測定，將pHpH調(diào)節(jié)在調(diào)節(jié)在6.56.5以下。以下。2、肝勻漿一定要磨得較細(xì)，細(xì)胞徹