3 核酸和核仁組織區(qū)的組織化學

1、核酸和核仁組織區(qū)的組織化學核酸和核仁組織區(qū)的組織化學核酸的分布與組成成分核酸的分布與組成成分核酸的分布核酸的分布:細胞質細胞質細胞核細胞核染色質染色質核仁核仁核酸核酸多核苷酸多核苷酸單核苷酸單核苷酸┌磷酸磷酸┌戊糖：核糖或脫氧核糖戊糖：核糖或脫氧核糖└核苷核苷└堿基：堿基：A，T，C，G，U核酸的種類與染色應用核酸的種類與染色應用RNA：胞質及核內：胞質及核內戊糖：核糖戊糖：核糖腺嘌呤（腺嘌呤（A），鳥嘌呤（，鳥嘌呤（G），胞嘧啶（，胞

2、嘧啶（C），尿嘧啶（，尿嘧啶（U）DNA：核內：核內戊糖：脫氧核糖戊糖：脫氧核糖腺嘌呤（腺嘌呤（A），鳥嘌呤（，鳥嘌呤（G），胞嘧啶（，胞嘧啶（C），胸腺嘧啶（胸腺嘧啶（T）核酸的種類與染色應用核酸的種類與染色應用核酸染色應用核酸染色應用免疫性疾病的診斷與研究免疫性疾病的診斷與研究免疫缺損免疫缺損AID過敏性反應過敏性反應腫瘤的診斷與研究腫瘤的診斷與研究淋巴瘤淋巴瘤反應性病變反應性病變瘤樣病變瘤樣病變核酸的染色方法核酸的染色方法1，F(xiàn)e

3、ulgen法2，甲基綠，甲基綠派洛寧法派洛寧法FeulgenRossenbeck法原理：原理：脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸→→→→脫氧戊糖與堿基斷開，戊糖端形成醛基（脫氧戊糖與堿基斷開，戊糖端形成醛基（CHOCHO）與）與Schiff試劑（無試劑（無色）反應色）反應→→→→紫紅色（紫紅色（DNA部位）部位）PAS法:用過碘酸強氧化劑使六碳糖中的用過碘酸強氧化劑使六碳糖中的12乙二醇基（乙二醇基（—CHOHCHOH—）變成二醛基（）變成二醛基

4、（—CHO）然后與）然后與Schiff試劑反應，形成紫紅色的化合物，在有多糖的部位，就會呈現(xiàn)紫紅色試劑反應，形成紫紅色的化合物，在有多糖的部位，就會呈現(xiàn)紫紅色陽性反應。陽性反應。原理原理Schiff試劑中的酸濃度對兩個反應的效果不同試劑中的酸濃度對兩個反應的效果不同甲基綠甲基綠—派洛寧為堿性染料，它分別能與細胞內的派洛寧為堿性染料，它分別能與細胞內的DNA、RNA結合呈現(xiàn)不同顏色。甲基綠結合呈現(xiàn)不同顏色。甲基綠與派洛寧作為混合染料與派洛

5、寧作為混合染料甲基綠與染色質中甲基綠與染色質中DNA選擇性結合顯示綠色或藍色；選擇性結合顯示綠色或藍色；派洛寧與核仁、細胞質中的派洛寧與核仁、細胞質中的RNA選擇性結合顯示紅色選擇性結合顯示紅色甲基綠甲基綠派洛寧染色機制派洛寧染色機制電離作用電離作用電離后甲基綠在五價氮處產生二個正電荷，堿性較強，與細胞核結合，派洛寧電離后僅產電離后甲基綠在五價氮處產生二個正電荷，堿性較強，與細胞核結合，派洛寧電離后僅產生一個正電荷較弱與胞質結合生一個正

6、電荷較弱與胞質結合聚合作用聚合作用甲基綠與高聚合的甲基綠與高聚合的DNA結合，派洛寧與聚合低的結合，派洛寧與聚合低的RNA結合結合甲基綠甲基綠派洛寧法派洛寧法methylgreenpyronin染色步驟：染色步驟：1切片脫蠟如常，水洗切片脫蠟如常，水洗202M醋酸緩沖液稍洗醋酸緩沖液稍洗3甲基綠派洛寧液染色甲基綠派洛寧液染色1—2小時小時4傾去染液，用濾紙吸干切片上多余水分傾去染液，用濾紙吸干切片上多余水分5用正丁醇迅速分化用正丁醇迅速

7、分化10—20秒6經丙酮迅速脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。經丙酮迅速脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。結果：結果：DNA呈綠色，呈綠色，RNA呈紅色。呈紅色。甲基綠甲基綠派洛寧法派洛寧法methylgreenpyronin2%甲基綠儲存液：甲基綠儲存液：甲基綠甲基綠2g，ddH2O100ml2%派洛寧儲存液：派洛寧儲存液：派洛寧派洛寧2g，ddH2O100ml甲基綠用氯仿抽提甲基綠用氯仿抽提56次分液漏斗，加等量氯仿分液漏斗，加等量氯仿

8、充分搖蕩數(shù)分鐘后靜置充分搖蕩數(shù)分鐘后靜置液體分層，放掉分液漏斗中下層的紫色氯仿液體分層，放掉分液漏斗中下層的紫色氯仿直至氯仿洗不下紫色為止直至氯仿洗不下紫色為止派洛寧用氯仿抽提派洛寧用氯仿抽提56次同上用氯仿抽提數(shù)次，待氯仿不顯紅色為止同上用氯仿抽提數(shù)次，待氯仿不顯紅色為止工作液：工作液：2%甲基綠儲存液（抽提后）甲基綠儲存液（抽提后）9ml2%派洛寧儲存液派洛寧儲存液4ml用0.2M醋酸鹽緩沖液（醋酸鹽緩沖液（pH4.8）調PH到4.