進(jìn)出口動物源性食品中三聚氰胺快速檢測方法—elisa編制說明

1、1《進(jìn)出口動物源性食品中三聚氰胺快速檢測方法進(jìn)出口動物源性食品中三聚氰胺快速檢測方法ELISA法》編制說明編制說明一、標(biāo)準(zhǔn)制定的任務(wù)來源及意義本標(biāo)準(zhǔn)的制定工作是由中華人民共和國國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會提出并歸口，由北京出入境檢驗(yàn)檢疫局研究起草，計(jì)劃編號為2008B184。本標(biāo)準(zhǔn)制定了進(jìn)出口動物源性食品中三聚氰胺快速檢測方法ELISA法。三聚氰胺（英文名Melamine，CAS:108781，分子式C3N6H6）是一種用途廣泛的有機(jī)化工

2、原料，禁止在食品和動物食品中添加，但因其結(jié)構(gòu)中含有多個氨基氮而被一些不法商販添加到植物蛋白中以提高蛋白的含量。其危害最早源于2007年3月美國發(fā)生的寵物貓、狗中毒死亡事件。經(jīng)美國FDA證實(shí)，貓、狗死亡是寵物食品的原料受三聚氰胺污染，并指出其中小麥蛋白原料來自中國，由此引起了國內(nèi)外對三聚氰胺的高度關(guān)注。三聚氰胺一方面可能殘留于食用動物組織，進(jìn)而污染畜產(chǎn)品食品；另一方面，三聚氰胺也可以直接污染小麥、大米等谷物食品。無論何種污染途徑，都可能危

3、害人類健康、甚至造成人類中毒、死亡的危險。2008年9月16日，國家質(zhì)檢總局公布了全國嬰幼兒配方奶粉22家生產(chǎn)企業(yè)的69批次產(chǎn)品檢出了含量不同的三聚氰胺的檢查結(jié)果，再次將三聚氰胺聚焦為食品安全檢測中的重要檢測對象。三聚氰胺在食品中的限量值，目前僅針對乳和乳制品。對于嬰幼兒配方奶粉限量值我國和香港地區(qū)、澳大利亞、新西蘭、加拿大以及歐盟都制定在1mgkg，美國沒有對嬰幼兒配方奶粉制定一個控制的限量；我國對其他乳和含乳15%的食品限量值為2.

4、5mgkg。三聚氰胺傳統(tǒng)的檢測方法有重量法、升華法，但方法檢測限不能滿足要求。近來發(fā)展起了色譜法。我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布《飼料中三聚氰胺的測定》公告，確定了飼料中三聚氰胺測定的農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NYT13722007，該標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（GCMS），HPLC法最低定量限為2mgkg，GCMS法最低定量限為0.05mgkg。2008年10月7號，國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局、國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會批準(zhǔn)發(fā)布了《原料乳與乳制

5、品中三聚氰胺檢測方法》（GBT223882008）國家標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定了高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜法三種方法為三聚氰胺的檢測方法，檢測定量限分別為2mgkg、0.05mgkg和0.01mgkg。2008年10月15日，又發(fā)布了《原料乳中三聚氰3五、方法的主要技術(shù)指標(biāo)1、方法檢測限研究建立的三聚氰胺直接競爭ELISA檢測方法，其標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性范圍為20～500gL。經(jīng)加標(biāo)回收試驗(yàn)，針對嬰兒奶粉和嬰兒豆奶粉的檢測限≤1.

6、0mgkg，液態(tài)奶及含乳巧克力、乳清粉、酸奶等含乳食品樣品經(jīng)前處理及掩蔽劑稀釋后的檢測限≤2.5mgkg，均滿足目前三聚氰胺的安全限量標(biāo)準(zhǔn)（MRLs）的要求，即針對嬰幼兒為1.0mgkg和其他乳品和含乳制品為2.5mgkg。同時本方法還使用于肉類（雞、魚肉）、雞蛋和醬油。2、方法精密度嚴(yán)格按本標(biāo)準(zhǔn)所確定的操作程序，對三聚氰胺檢測進(jìn)行了精密度的測試，分別以板內(nèi)變異和板間變異表示。取六個含不同三聚氰胺濃度的實(shí)驗(yàn)樣品，進(jìn)行ELISA分析，每個

7、濃度實(shí)驗(yàn)樣品作10個復(fù)孔，對測得抑制率（IC）進(jìn)行分析，變異系數(shù)均＜10%。取六個不同濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行ELISA分析，每個濃度每天作兩次分析，綜合5天測得的抑制率（IC）吸光度值進(jìn)行分析，變異系數(shù)均＜10%。3、方法準(zhǔn)確度選擇10種不含三聚氰胺的樣品，分別添加三聚氰胺至樣品中3個不同含量水平，提取后采用直接競爭ELISA方法檢測，計(jì)算樣品加標(biāo)回收率，以加標(biāo)回收率表示檢測方法的準(zhǔn)確度。結(jié)果顯示，回收率均在81128%之間（見表