山茱萸總苷的提取和大孔吸附樹脂分離純化工藝考察

1、【收稿日期】2012816【基金項目】國家自然基金“從調(diào)控骨鈣素分泌研究六味地黃丸干預(yù)2型糖尿病的作用機制”（30901988）；天津市高等學(xué)?？萍及l(fā)展基金計劃項目“山茱萸血中移行成分調(diào)節(jié)MSCs脂向骨向分化平衡機制研究”（20110206）【第一作者】宋春敬，碩士，實驗師，主要從事中西醫(yī)結(jié)合研究，Tel：022595962811，Email：songchunjingjing@【通訊作者】王艷，碩士，講師，主要從事中藥炮制學(xué)和中藥藥理學(xué)

2、研究，Tel：02259596235，Email：paozhijiaoxue@山茱萸總苷的提取和大孔吸附樹脂分離純化工藝考察山茱萸總苷的提取和大孔吸附樹脂分離純化工藝考察宋春敬1，王艷1﹡，于順祿2，王慧明3（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院天津市中藥化學(xué)與分析重點實驗室，天津300193；2.天津市天津醫(yī)院，天津300211；3.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津300193）【摘要】：目的：目的：研究山茱萸中總苷的最佳提取工藝及大孔樹脂純化

3、工藝。方法：方法：以山茱萸干燥成熟果實為材料提取山茱萸總苷，莫諾苷含量為評價指標(biāo)，選擇乙醇濃度、料液比、提取時間、提取次數(shù)為考察因素，采用單因素和正交試驗優(yōu)選提取工藝，并進行驗證試驗。采用最佳工藝提取后，上HPD300型大孔吸附樹脂，水洗后分別用10%，30%，50%，70%的乙醇洗脫，考察大孔樹脂富集、純化山茱萸總苷的吸附性能和洗脫參數(shù)。結(jié)果：結(jié)果：50%乙醇是山茱萸總苷的最佳提取溶劑，提取次數(shù)對山茱萸總苷含量的影響最顯著。大孔吸附樹

4、脂純化過程中山茱萸總苷富集于30%乙醇洗脫液部分，洗脫流速為1.5BVh1，洗脫劑用量為3BV，洗脫率達94.9%。結(jié)論：結(jié)論：山茱萸中山茱萸總苷的最佳提取工藝是50%乙醇提取，料液比1∶8，提取時間3h，提取次數(shù)3次。采用大孔吸附樹脂可較好地純化山茱萸總苷?！娟P(guān)鍵詞】：山茱萸總苷正交實驗；提取工藝；大孔吸附樹脂StudyStudyononextractionextractionpurificationpurificationofofc

5、nuscnusofficinalisofficinalissaposinssaposinswithwithmacropousmacropousresinresinSongChunjing1，WangYan1﹡，YuShunlu2，WangHuiming3(1.TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin300193，China；2.TianJinHospital，Tianji

6、n300211，China；3.FirstTeachingHospitalofTianjinUniversityofTCM)[Abstract][Abstract]Objective:Objective:Thisstudyaimedtooptimizetheextractiontechniquesexplethebestconditionfseparatingpurifyingcnusofficinalissaposinsbymacro

7、pousresin.Method:Method:Cnusofficinialissaposinswereextractedfromdryripenedcnelthecontentofmronisidewasusedasanevaluationindex.Thefactsthatweconsideredtooptimizeduringextractionwereethanolconcentration，ratioofmaterial，ex

8、tractingtimeextractingtimes.Specifically，weusedsinglefacttest，thogonaltestverificationexperimenttogettheoptimalextractioncondition.Afterextractedbytheoptimalprocedure，thecnusofficinialissaposinswerethenpurifiedwithHPD300

9、macropousresinfinallyelutedwith10%，30%，50%70%ethanolafterwashedbywater.Theparametersfadsptionelutionofcnusofficinialissaposinsthatwasenrichedpurifedbymacropousresinwererecded.ResuLtResuLt:Weshowedthat50%ethanolhadabetter

10、adsptionpropertyfcnusofficinialissaposinsextractingtimesalsohadanobviousaffectiononthecontentofcnusofficinialissaposins.Thefavableparametersfpurificationofcnusofficinialissaposinsbymacropoussptiveresinare:theeluterate1.5

11、BVh1，theelutevolume3BVtheelutionefficiency94.9%.Thecnusofficinialissaposinswereenrichedin30%ethanolicextractive.Conslusion:Conslusion:Theoptimalextractingparametersfcnusofficinialissaposinswereasfollowings:50%ethanol，the

12、ratioofmaterialtowater1:8，extractionf3timesin3hours.Itwasalsosμggestedthatadsptionbymacropousresinwasanefficientwaytoisolatepurifycnusofficinialissaposins.2.2.82.2.8加樣回收實驗加樣回收實驗取已知含量的山茱萸粉末約0.05g，精密稱定，加入莫諾苷對照品適量，按供試品溶液制備方

13、法制備，測定其含量并計算回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明此法加樣回收率良好。表1莫諾苷加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)編稱樣量樣品值加入量測得值回收率平均回收率RSD號（g）（mg）（mg）（mg）（%）（%）（%）10.05320.90061.041.962102.120.05210.88211.041.938101.530.05400.91421.041.986103.1101.22.6840.05020.84981.041.94104.8

14、50.05150.87191.041.90199.060.05410.91591.041.92196.62.22.2山茱萸總苷提取工藝優(yōu)化山茱萸總苷提取工藝優(yōu)化2.2.12.2.1提取溶劑的選擇提取溶劑的選擇稱取山茱萸藥材2g，選用蒸餾水和30%，50%，70%，95%的乙醇作為提取溶劑，料液比1：10，回流提取4h，過濾并離心，取上清液50%乙醇定容至50mL量瓶中，分別吸取2mL，于水浴上蒸干，80%甲醇溶解并定容至25mL量瓶中，

15、得供試品溶液。0.45μm微孔濾膜濾過，按2.1.1色譜條件進樣，測定莫諾苷含量。結(jié)果見表1。由表1可知，用乙醇作為溶劑提取山茱萸中總苷，醇提液中莫諾苷含量明顯高于水提液，其中50%乙醇提取液莫諾苷含量最高，故以50%乙醇作為山茱萸總苷的提取溶劑。表1不同提取溶劑對山茱萸中莫諾苷含量的影響溶劑莫諾苷含量（mgg1）蒸餾水10.8830%乙醇11.9050%乙醇13.0070%乙醇12.1095%乙醇11.192.2.22.2.2正交試驗

16、設(shè)計方案正交試驗設(shè)計方案選擇料液比（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）作為參考因素，以莫諾苷的含量作為評價指標(biāo)，用L9(34)正交設(shè)計表安排試驗。所選因素水平見表2。表2因素水平表因素料液比（A）提取時間（B）提取次數(shù)(C)11:62121:83231:10432.2.32.2.3正交試驗供試品的制備與測定正交試驗供試品的制備與測定稱取山茱萸藥材2g，根據(jù)表2按L9(34)正交設(shè)計表安排試驗，用50%乙醇回流提取，過濾合并濾液，離心，