凹葉厚樸莖段愈傷組織誘導(dǎo)中的褐變控制研究

1、凹葉厚樸莖段愈傷組織誘導(dǎo)中的褐變控制研究凹葉厚樸莖段愈傷組織誘導(dǎo)中的褐變控制研究【摘要】【摘要】目的研究愈傷組織誘導(dǎo)過程中的褐變問題。方法：將采集的標(biāo)本進(jìn)行外植體滅菌法再接種到培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基中加抗褐變劑，進(jìn)行防褐變?cè)囼?yàn)。結(jié)果外植體在4℃冰箱冷藏48h的預(yù)處理對(duì)褐變有較好的控制效果。在培養(yǎng)基中加入抗褐變劑比加入吸附劑抗褐變效果好，抗褐變劑中Vc的效果最佳，吸附劑PVP比活性炭好。結(jié)論培養(yǎng)條件，以低溫遮光處理效果較好，光、溫兩個(gè)因素中，凹

2、葉厚樸對(duì)光敏感，遮光能有效抑制褐變。液體淺層靜置培養(yǎng)10d后轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)抗褐變的效果比單純的固體培養(yǎng)效果好?！娟P(guān)鍵詞】【關(guān)鍵詞】1.1.凹葉厚樸凹葉厚樸（拉丁名：Magnoliaofficinalissubsp.biloba(Rehd.etWils.)ChengetLaw中文名：凹葉厚樸拉丁科名：Magnoliaceae中文科名：木蘭科中文屬名：木蘭屬海拔下限：400(米)海拔上限：1200(米)保護(hù)級(jí)別：國家Ⅱ級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生植物（國務(wù)

3、院1999年8月4日批準(zhǔn)）保護(hù)措施：產(chǎn)地有關(guān)部門亦應(yīng)采取保護(hù)措施）；2.2.莖段；莖段；（愈傷組織中文名稱：愈傷組織英文名稱：calluscalli(復(fù))定義：原指植物體受傷時(shí)產(chǎn)生于傷口周圍的組織?，F(xiàn)多指切取植物體的一部分，置于含有生長素和細(xì)胞分裂素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生的無定形的組織團(tuán)塊。應(yīng)用學(xué)科：細(xì)胞生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科）；細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞工程（二級(jí)學(xué)科）；3.3.褐變控制褐變控制；4.4.冷藏外植體冷藏外植體；5.抗褐變劑；抗褐變劑；

4、6.6.吸附劑：吸附劑：（吸附劑是能有效地從氣體或液體中吸附其中某些成分的固體物質(zhì)。吸附劑一般有以下特點(diǎn)：大的比表面、適宜的孔結(jié)構(gòu)及表面結(jié)構(gòu)；對(duì)吸附質(zhì)有強(qiáng)烈的吸附能力；一般不與吸附質(zhì)和介質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)制造方便，容易再生；有良好的機(jī)械強(qiáng)度等。吸附劑可按孔徑大小、顆粒形狀、化學(xué)成分、表面極性等分類，如粗孔和細(xì)孔吸附劑，粉狀、粒狀、條狀吸附劑，碳質(zhì)和氧化物吸附劑，極性和非極性吸附劑等。）7.7.液體淺層靜置培養(yǎng)液體淺層靜置培養(yǎng)凹葉厚樸Maga

5、noliabiloba（RehdetWils）cheng為木蘭科植物，以干燥根皮及枝皮入藥，有燥濕消痰、下氣除滿功效，用于治療濕滯傷中、消化不良、嘔吐瀉痢、痰飲咳喘等病癥。近年來，凹葉厚樸野生資源瀕臨枯竭，已被列為國家Ⅲ級(jí)保護(hù)植物。劉賢旺等[1]對(duì)凹葉厚樸進(jìn)行了組織培養(yǎng)及愈傷組織超低溫保存的研究，為凹葉厚樸的資源再生和種質(zhì)保存提供了寶貴的技術(shù)資料和理論依據(jù)。在此基礎(chǔ)上開展試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在凹葉厚樸莖段組織培養(yǎng)過程中，褐化現(xiàn)象嚴(yán)重，需要多次轉(zhuǎn)瓶

6、才能誘導(dǎo)出愈傷組織。鑒于此，筆者專門針對(duì)凹葉厚樸莖段組織培養(yǎng)中出現(xiàn)的褐變現(xiàn)象進(jìn)行了一系列比較試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。1材料與方法材料與方法1.1外植體及培養(yǎng)基4月底采自湖南省森林植物園，以嫩枝頂芽及稍下的莖段作外植體。愈傷組織的誘導(dǎo)采用劉賢旺的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，即：B52，4D2mgL6BA1mgL蔗糖30gL，pH5.8~6.0。每次處理10瓶，每瓶5個(gè)外植體，外植體大小約為0.6cm0.6cm。護(hù)劑[4]1617，防止褐變的效果比無機(jī)吸附劑活性炭

7、好。（3）培養(yǎng)條件以低溫遮光處理效果較好，光溫兩個(gè)因素中，凹葉厚樸對(duì)光敏感，遮光能有效抑制褐變，這可能是在黑暗條件下，阻斷了酚類物質(zhì)的生化合成途徑，降低了酚類化合物的含量，同時(shí)抑制了PPO活性，減輕了酚類物質(zhì)的氧化有關(guān)[4]18，光照會(huì)提高PPO的活性，促進(jìn)酚類物質(zhì)的氧化。溫度對(duì)褐變?cè)斐傻挠绊懹袃蓚€(gè)方面的原因：較低的溫度有利于傷口的愈合；另外，會(huì)降低PPO的生物活性，從而減輕褐變[2]63。（4）液體淺層靜置培養(yǎng)10d后轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)比單

8、純的固體培養(yǎng)效果好，前期的液體淺層靜置培養(yǎng)使傷口處外溢的酚類物質(zhì)能迅速擴(kuò)散到培養(yǎng)液中去，減輕了醌類物質(zhì)在外植體四周的聚集，自體抑制效應(yīng)減弱。【參考參考文獻(xiàn)文獻(xiàn)】[1]劉賢旺，杜勤，賴學(xué)文.凹葉厚樸組織培養(yǎng)的研究[J].江西林業(yè)科技，1997，（2）：14.[2]于守超趙蘭勇王芬，等.植物組織培養(yǎng)中外植體褐變機(jī)理研究進(jìn)展[J].山東林業(yè)科技，2004，(5).[3]蘇夢(mèng)云姜景民.樂東擬單性木蘭莖段愈傷組織誘導(dǎo)與褐變控制的研究[J].林業(yè)科