中國先天性心臟病患者TBX1基因突變的研究.pdf

1、目的：22q11.2微缺失綜合征（22q11.2 deletion syndrome，22q11DS）是人類最常見的微缺失綜合征，以心臟畸形、顱面畸形、胸腺發(fā)育不良、低鈣血癥、認知和精神異常等為主要表現(xiàn)。其中，心臟畸形因為較高的發(fā)生率以及作為致死的主要原因受到研究者的重視。近年的研究表明，Tbx1是22q11.2微缺失綜合征最重要的候選基因，其在心血管發(fā)育過程中起重要作用。我們通過聚合酶鏈反應-單鏈構(gòu)像多態(tài)性(PCR-SSCP)技術(shù)檢測

2、中國先天性心臟病患者TBX1基因突變的情況，以探討TBX1基因突變與非綜合征心臟畸形發(fā)生的相關(guān)性。
　　 方法：應用聚合酶鏈反應-單鏈構(gòu)像多態(tài)性(PCR-SSCP)技術(shù)對73例先天性心臟病患者和70例健康人樣本的TBX1基因進行突變分析。(1)常規(guī)酚氯仿法從73例先天性心臟病患者和70例健康人的外周血中提取基因組DNA；(2)聚合酶鏈反應(PCR)分別擴增TBX1基因編碼區(qū)內(nèi)的各個外顯子；(3)應用單鏈構(gòu)像多態(tài)性(SSCP)技術(shù)

3、檢測PCR產(chǎn)物；(4)對SSCP發(fā)現(xiàn)改變的PCR產(chǎn)物進行測序；(5)采用χ2檢驗確定TBX1核苷酸變異的頻率差異。
　　 結(jié)果：先天性心臟病患者和正常對照組中均檢測到928G→A核苷酸變異和933A→G核苷酸變異。73例先天性心臟病患者中存在1例純合928G→A核苷酸變異，8例雜合928G→A核苷酸變異（其中有2例伴有雜合933A→G核苷酸變異），23例純合933A→G核苷酸變異，2例雜合933A→G核苷酸變異（即為上述伴雜合9

4、28G→A核苷酸變異者）。正常對照組中存在4例雜合928G→A核苷酸變異（其中有2例伴有雜合933A→G核苷酸變異），22例純合933A→G核苷酸變異，2例雜合933A→G核苷酸變異（即為上述伴雜合928G→A核苷酸變異者）。經(jīng)χ2檢驗，928G→A和933A→G核苷酸變異的頻率在先天性心臟病患者和正常對照組之間均無顯著性差異(928G→A：χ2=1.89，P＞0.05；933A→G：χ2=2.43×10-5，P＞0.05)。