免疫細胞化學(xué)實驗服務(wù)

1、免疫細胞化學(xué)實驗服務(wù)免疫細胞化學(xué)實驗服務(wù)一、免疫細胞化學(xué)技術(shù)的概述免疫細胞化學(xué)(immunocytochemistryICC)——是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定細胞內(nèi)抗原的成分(主要是多肽和蛋白質(zhì))，對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫細胞化學(xué)。免疫細胞化學(xué)是將免疫學(xué)基本原理與細胞化學(xué)技術(shù)相結(jié)合所建立起來的新技術(shù)，根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特點，檢測細胞內(nèi)某

2、種多肽、蛋白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大分子物質(zhì)的存在與分布。【晶萊生物】(一)對抗原和抗體的要求具有特異性高和親和力強的抗體是實驗成功的首要條件。–對抗體的要求：純度高、比活性強；高度特異性抗體的獲得，取決于抗原的純度。–對抗原的要求：純度高，免疫原性強，穩(wěn)定無變化。(二)抗原(antigenAg)抗原的概念：凡是在機體內(nèi)引起體液免疫和(或)細胞免疫反應(yīng)的物質(zhì)，稱為抗原。抗原具有兩個方面的特性：–免疫原性：引起機體產(chǎn)生抗體和(或)致敏淋細

3、胞的特性；–免疫反應(yīng)性：抗原能與相應(yīng)的抗體及致敏淋巴細胞發(fā)生特異的結(jié)合或反應(yīng)的特性。根據(jù)抗原是否顯示免疫原性分為：–完全抗原：分子量較大，一般在10kDa以上，并具有較復(fù)雜的化學(xué)組成。?免疫原性最強的是蛋白質(zhì)抗原，多糖次之；脂類和核酸必需和蛋白質(zhì)及多糖形成復(fù)合物才具有良好的免疫原性。–半抗原：又稱為不完全抗原，分子量較小。例如：某些短肽、多糖、類脂和藥物等。?半抗原必需與載體結(jié)合，才能獲得免疫原性。載體通常是具有高度免疫原性的大分子物質(zhì)

4、，具有將免疫原性傳遞給耦聯(lián)的半抗原能力。–常用的載體有鑰孔血藍蛋白(keyholelimpethemocyanin，KLH)、牛血清白蛋白(bovineserumalbuminBSA)、卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)等。–用戊二醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過功能基團NH2、COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為5kDa結(jié)合5～25個分子的小肽。（三）抗體(antibodyAb)1、抗體的概念：機體受到抗原刺激后，由漿細胞合成并

5、分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白，被稱為抗體。–抗體主要存在于血清內(nèi)；–抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不一定都是抗體。–免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種，既IgG、IgD、IgE、IgA、IgM。2、免疫組化實驗中常用的抗體：單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體：是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，是應(yīng)用細胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備的。–特異性強、抗體產(chǎn)量高。多克隆抗體：是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血

6、中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。–特異性低，會產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)。–多克隆抗體廣泛應(yīng)用于石蠟包埋組織切片，可減少假陰性染色機會。–抗原與抗體的結(jié)合，要求量保持一定比例，當抗原或抗體過量時，是不能聚合成大顆粒。3、抗體的制備——多克隆抗體的制備動物的選擇佐劑(adjuvant)免疫方法免疫劑量抗體效價的測定放血或定期抽血(1)動物的選擇選擇什么動物免疫取決于：所需抗血清的量–小鼠只能提供1.0～1.5ml的血液