2017 藥物相關基因檢測在腎內科的臨床應用

1、,,藥物相關基因檢測在腎內科的臨床應用,中山大學附屬第五醫(yī)院藥學部2017. 12. 26,“別嘌醇”致Stevens-Johnson綜合征 （剝脫性皮炎）,,,每年220萬患者出現(xiàn)藥物不良反應每年需花費1770億美元藥物撤離市場的最主要原因之一導致5%住院率每年70萬人傷殘或死亡排在美國住院病人死因的第6位59%藥物不良反應由藥物代謝酶的遺傳多態(tài)導致,National Vital Statistics Reports,

2、Vol. 56, No. 10, March 7, 2008, 2001United States Data,藥物不良反應很嚴重,藥物治療個體反應差異是普遍現(xiàn)象,使用相同劑量后體內藥物濃度和總量不同,藥物有效性的個體差異,,降壓藥的劑量范圍,降糖藥的劑量范圍,,年齡老年，兒童，新生兒,,性別,體重/身高,,合并癥,病程,,,,,,,,影響治療效果的因素,器官功能肝臟, 腎臟, 心臟,環(huán)境因素食物 /吸煙 / 合并用藥,無效,安全

3、有效,毒性,相同治療方案,,決定性因素??！,藥物效應和毒性差異,基因組,基因多態(tài)性,,,,,,,,,藥物靶點,藥物轉運體,藥物代謝酶,,,基因,,基因相關的劑量效應,與藥物作用相關蛋白的基因多態(tài)性多有劑量效應,精準醫(yī)學的演化,,精準醫(yī)學：個體化和人人受益,59%藥物不良反應由藥物代謝酶的遺傳多態(tài)導致,,,CG,,TA,,SNP,CYP2C9*2,No enzymatic activity,,430C>T (Arg144Cys)

4、,Cys,個體差異的遺傳基礎-單核苷酸多態(tài)性(SNP),90%以上的人類變異是由SNP引起導致人類藥物代謝和反應差異的主要原因,,G?T突變,遺傳變異的類型,...C C A T T G A C...,...C C A T T G A C...,…G G T A A C T G...,…G G T A A C T G...,...C C A T T G A C...,...C C G T T G A C...,…G G T A A C

5、 T G...,…G G C A A C T G...,...C C G T T G A C...,...C C G T T G A C...,…G G C A A C T G...,…G G C A A C T G...,wt/wt野生型純合子,SNPs的基因型,,,,X,X,X,wt/mut野生型雜合子,mut/mut突變純合子,遺傳因素引起個體差異的作用環(huán)節(jié),通過檢測藥物相關基因，預先將患者分為：（1）藥物的應答組或無應答

6、組（2）藥品不良反應的高風險組或低風險組（3）設計個體化給藥方案（選擇合適的藥品，計算給藥劑量）,,不良反應最小療效最佳,,精準用藥,科室相關藥物,阿司匹林/GP IIIa PlA2 、PEAR1、PTGS1、GP1BA、LTC4S、GSTP1別嘌醇/HLA-B*58013.他克莫司（FK506）/CYP3A5*34.糖皮質激素沖擊（甲強龍等）/PAI-1（4G/5G）,別嘌醇,別嘌醇,別嘌醇,別嘌醇,他克莫司,他克莫司,病

7、例,病例,病例,檢驗結果,結果解讀,啟示,糖皮質激素沖擊,長期接受糖皮質激素治療或接受大劑量糖皮質激素沖擊治療的患者中9%-40%可能會發(fā)生股骨頭壞死，同時伴有糖皮質激素誘導的骨質疏松。研究發(fā)現(xiàn)，PAI-1基因的4G等位基因發(fā)生股骨頭壞死的風險比5G等位基因高2~3倍。ABCB1基因型的3435C比3435T發(fā)生股骨頭壞死的風險也高2~3倍。相關藥物基因：1、纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）：內源性纖溶活性的關鍵調節(jié)因子，

8、2、ABCB1 3435：p糖蛋白家族，藥物轉運蛋白，MDR1基因,每日劑量、激素暴露時間與股骨頭壞死有著密切關系,PAI-1 4G5G基因型頻率與股骨頭壞死(%),糖皮質激素沖擊,ABCB1 3435CT基因型頻率與股骨頭壞死(%),注：CT、TT者，均為PAI-1 4G5G,糖皮質激素沖擊,糖皮質激素沖擊,基因型風險度與股骨頭壞死發(fā)生概率,糖皮質激素沖擊,技術背景,正在應用的基因檢測技術,? Southern blot分析 ?

9、PCR與實時熒光PCR ? 基因芯片（aCGH/CMA） ? 熒光原位雜交（FISH） ? Sanger測序 *? 新一代測序 （NGS）,實驗室選擇試驗平臺,目前實驗室選擇的檢測平臺是屬于一代測序的數(shù)字熒光雜交測序。,優(yōu)點：1.檢測速度快。2.非擴增，抗污染能力強，試驗準確。對實驗室要求較低。3.操作方便，無需提取基因組，白細胞膜裂解后即可測序。,缺點：1.無法檢測長序列。2.無法定量，只能檢測以SNP為主的定性。

10、3.只能檢測已知突變，由于無PCR步驟，DNA鏈無延伸。無法檢測未知突變。,我院開展藥物基因檢測情況,TL998A熒光檢測儀 基本原理：用已知的標記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。 具有快速、檢測信號強、雜交特異性高和可以多重染色等特點。,初期對所有位點進行準確性驗證,與Sanger法進行比較，一致性為99%。,各個平臺實驗室醫(yī)院每年按期參與衛(wèi)生部與上海臨床

11、檢驗中心的室間質評，目前為止所有醫(yī)院參與檢測次數(shù)達300次，通過率超過98%。,2012年1月起至今，200余家三甲醫(yī)院采用數(shù)字熒光分子雜交測序技術，建立個體化治療基因檢測實驗室，同時輔助實驗室人員開展藥物基因組學服務工作。,國內諸多三甲醫(yī)院的選擇,明確的操作SOP,根據(jù)設備及試劑特性，制定相應的操作SOP。保證各個實驗室操作，質控統(tǒng)一，可控。定期對所有實驗室設備進行維護保證檢測結果準確。,樣本運送溫度和時間的要求。DNA檢測樣本，可室

12、溫下運送， 建議8h內送至實驗室。如所需運送時間較長，則應將樣本置于冰上，必須保證樣本與冰屑充分接觸， 且冰屑應達到樣本的高度，建議采集后4h內送到。 樣本保存溫度和時間的要求。用于DNA檢測時，樣本可在2~8℃ 保存72h。如果樣本中含有紅細胞，應盡可能去除紅細胞后，再進行凍存。 DNA：如果純化后的DNA無DNA酶的污染，則可在TE緩沖液中室溫保存26周；2-8℃保存一年；-20℃保存7年；-70℃保存7年以上。懷疑可能