藥品質量標準分析方法驗證指導原則課件

1、藥品質量標準分析方法驗證指導原則,黑龍江省食品藥品檢驗檢測所姜連閣,藥品質量標準分析方法驗證指導原則收載于中國藥典2010版二部附錄Ⅱ-ⅩⅨ A 藥品質量標準分析方法驗證的目的是證明采用的方法適合于相應檢測要求。方法驗證在分析方法建立過程中具有重要的作用，并成為質量研究和質量控制的組成部分。只有經(jīng)過驗證的分析方法才能用于控制藥品質量。方法驗證是制訂質量標準的基礎。方法驗證是藥物研究過程中的重要內(nèi)容。,前 言,是判

2、斷采用的分析方法是否科學、合理，是否能有效控制藥品的內(nèi)在質量。從本質上講，方法驗證就是根據(jù)檢測項目的要求，預先設置一定的驗證內(nèi)容，并通過設計合理的試驗來驗證所采用的分析方法能否符合檢測項目的要求。對幾個分析方法的組合進行總體的評價,分析方法驗證的目的,1、建立藥品質量標準；2、藥品生產(chǎn)工藝變更；3、制劑的組分變更；4、對原分析方法進行修訂時。 方法驗證理由、過程和結果均應記載在藥品標準起草說明或修訂說明中。,分析方法驗證的

3、時機,鑒別試驗，雜質定量或限度檢查（儀器或非儀器檢測方法），原料藥或制劑中有效成分含量測定，制劑中其他成分（如防腐劑等）的測定。藥品溶出度、釋放度等檢查中溶出量等測試方法。,分析方法驗證的項目,1、準確度； 2、精密度 重復性 中間精密度 重現(xiàn)性 3、專屬性； 4、檢測限； 5、定量限； 6

4、、線性； 7、范圍； 8、耐用性。,分析方法驗證的內(nèi)容,,1、檢測的類型2、采用的技術3、檢測方法,視具體方法擬訂驗證的內(nèi)容,分析方法（步驟）：是指進行分析的方式和步驟。分析方法應給出完成每個分析試驗所需的詳細步驟?？赡馨ü┰嚻?、對照品和試劑的配制和制備；儀器的使用說明；標準曲線的繪制；計算公式的使用等信息，當然，分析方法的內(nèi)容不僅限于上述信息。在實際工作中，可以對實驗工作進行充分的設計，使得可以同時

5、考察多個適當?shù)尿炞C項目，提供分析方法科學的、綜合的能力情況，比如：專屬性、線性、范圍、準確度和精密度。,分析方法驗證的內(nèi)容,準確度：指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，一般以回收率（%）表示。準確度應在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。精密度：指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。 重復性：在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結果的精密度稱中間精密

6、度：在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果的精密度重現(xiàn)性：在不同實驗室由不同分析人員測定結果的精密度 專屬性：指在其他成分（如雜質、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。如方法不夠專屬，應采用多個方法予以補充 ，以獲得對待測物質所需的分離能力。,分析方法驗證的內(nèi)容,檢測限：指試樣中被測物能被檢測出的最低量。藥品的鑒別試驗和雜質檢查方法，均應通過測試確定方法的檢測限。常用的方法如下。 非

7、儀器分析目視法：用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。 信噪比法 ：用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:1時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。定量限：指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果應具一定準確度和精密度。雜質和降解產(chǎn)物用定量測定方法研究時，應確定定量限。 常用信噪比法確定定量限。一般

8、以信噪比為10:1時相應的濃度或注入儀器的量確定定量限。,分析方法驗證的內(nèi)容,線性：指在設計的范圍內(nèi)，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。應在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關系。制備一系列供試樣品，至少5份。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應信號可經(jīng)數(shù)學轉換，再進行線性回歸計算?！》秶褐改苓_到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應根據(jù)分析

9、方法的具體應用和線性、準確度、精密度結果和要求確定。 　耐用性：指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，為把方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。開始研究分析方法時就應考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應在方法中寫明。,分析方法驗證的內(nèi)容,驗證檢測項目的分類,1、鑒別 鑒別的目的在于判定被分析物是目標化合物，而非其它物質，用于鑒別的分析方法要求具有較強的專屬性。2、雜質檢查（限度試驗、定量試驗）

10、 雜質檢查主要用于控制主成分以外的雜質，如有機雜質、無機雜質等。 雜質檢查要準確反應供試品的純度特性，可分為限度試驗和定量試驗兩種情況。用于限度試驗的分析方法驗證側重專屬性和檢測限。用于定量試驗的分析方法驗證強調(diào)專屬性、準確度和定量限。,3、定量測定 定量測定包括含量測定、制劑的溶出度（釋放度）測定等，由于此類項目對準確性要求較高，故所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準確度和線性。4、其他特定檢

11、測項目。 其他特定檢測項目包括粒徑分布、旋光度、分子量分布等，由于這些檢測項目的要求與鑒別、雜質檢查、定量測定等有所不同，對于這些項目的分析方法驗證應有不同的要求。,驗證檢測項目的分類,,檢驗項目和驗證內(nèi)容,① 已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間精密度。② 如一種方法不夠專屬，可用其他分析方法予以補充。③ 視具體情況予以驗證。,1．鑒別反應 各論中鑒別項目的目的就是為待測物質的真?zhèn)舞b定提供確證信息。鑒別方法要保證具有

12、可能好的專屬性。應能與可能共存的物質或結構相似化合物區(qū)分。如方法不夠專屬，應采用多個方法予以補充。 不含被測成分的樣品，以及結構相似或組分中的有關化合物（活性物質和輔料能被區(qū)分開來），均應呈負反應。IR：結晶水、同類物質、結晶溶劑一個物質的紫外光譜極少能獨立成為鑒別的判斷依據(jù)。比值的專屬更強（有關物質增加對UV最大吸收的影響）本鑒別方法需要使用對照品，結合原位的化學反應，也就是在薄層展開后用適當?shù)娘@色劑進行顯色，可以增強 TL

13、C鑒別法的專屬性。TLC分離系統(tǒng)，盡管為了保證藥品的鑒別試驗，可能仍然需要對色譜條件的分離能力進行規(guī)定。如果出于保證鑒別試驗準確的目的，在鑒別項下會規(guī)定分離度要求。如果適用的話，純度檢查項下的TLC系統(tǒng)更適于作為鑒別方法。用于鑒別試驗的供試品溶液和對照品溶液的濃度應適當降低，使點樣量在 5~20ug。有時可能需要將某個通用檢測系統(tǒng)變更為更有區(qū)分力的檢測系統(tǒng)。,,,,,,,,,,,,,,,一、準確度,準確度系指用該方法測定的結果與真實

14、值或認可的參考值接近的程度。 一定的準確度為定量測定的必要條件，因此涉及到定量測定的檢測項目均需要驗證準確度，如含量測定、雜質定量試驗等。對于制劑一般以回收率試驗來進行驗證。 準確度應在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。,一、準確度,1．含量測定方法的準確度⑴ 原料藥 可用已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定的結果進行比較。,一、準確度,1．含量測

15、定方法的準確度⑵ 制劑 可用含已知量被測物的各組分混合物進行測定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定結果進行比較。,一、準確度,2．雜質定量測定的準確度可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定。如不能得到雜質或降解產(chǎn)物，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典標準方法或經(jīng)過驗證的方法。在不能測得雜質或降解產(chǎn)物的響應因子或對原料藥的相對

16、響應因子情況下，可在線測定雜質的相關數(shù)據(jù)，如采用二極管陣列檢測器測定紫外光譜，當雜質的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應因子近似計算雜質含量（自身對照法）。應明確表明單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比（%）或面積比（%）。,一、準確度,3．數(shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個測定結果進行評價，例如，設計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進行測定。應報告已知加入量的回收率（%），或測定結果平均值與真實值之差及其相

17、對標準偏差或可信限。用于藥品的含量測定時，樣品濃度應設定于含量100％的±20％之間；用于溶出（釋放）曲線考察時，樣品濃度應設定于全曲線范圍的上、中、下部位。,二、精密度,精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。精密度包括：重復性、中間精密度和重現(xiàn)性。含量測定和雜質的定量測定應考慮方法的精密度。,二、精密度,1．重復性在相同條件

18、下，由一個分析人員測定所得結果的精密度稱為重復性； 在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個測定結果進行評價，例如，設計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試溶液，進行測定。或100%的濃度水平，用至少測定6次的結果進行評價。,二、精密度,2．中間精密度在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果之間的精密度，稱為中間精密度； 為考察隨機變動因素對精密度的影響，應設計方案進行中間精密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設備

19、。,二、精密度,3．重現(xiàn)性在不同實驗室由不同分析人員測定結果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。當分析方法將被法定標準采用，應進行重現(xiàn)性試驗。應注意重現(xiàn)性試驗用的樣品本身的質量均勻性和貯存運輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結果。,三、專屬性,專屬性系指在其他成分（如雜質、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。鑒別反應、雜質檢查、含量測定方法、有機溶劑殘留量測定等均應考察其專屬性。如方法不夠專屬，應采用多個方法

20、予以補充。,三、專屬性,1．鑒別反應應能與可能共存的物質或結構相似化合物區(qū)分。需確證含被分析物的供試品呈正反應，而不含被測成分的陰性對照呈負反應，結構相似或組分中的有關化合物也應呈負反應。,三、專屬性,2．雜質檢查 作為純度檢查，所采用的分析方法應確?？蓹z出被分析物中雜質的含量，如有關物質、重金屬、有機溶劑等。因此雜質檢查要求分析方法有一定的專屬性。在雜質可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質，證明雜質與共存物質能得到分離

21、和檢出，并具適當?shù)臏蚀_度與精密度。,三、專屬性,2．雜質檢查在雜質或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過與另一種已證明合理但分離或檢測原理不同、或具較強分辨能力的方法進行結果比較來確定。或將供試品用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進行破壞（制劑應考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質個數(shù)和量。必要時可采用二極管陣列檢測和質譜檢測，進行色譜峰純度檢查。,三、專屬性,3、含量測定含量測定目的是得到供試品中被分析物的含量或

22、效價的準確結果。在雜質可獲得的情況下，對于主成分含量測定可在供試品中加入雜質或輔料，考察測定結果是否受干擾，并與未加雜質和輔料的供試品比較測定結果。,三、專屬性,3、含量測定在雜質或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可采用另一個經(jīng)驗證了的或藥典方法進行比較，對比兩種方法測定的結果。也可采用破壞性試驗（強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進行含量測定，比較測定結果。必要時進行色譜峰純度檢查，證明含

23、量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。,三、專屬性,2．含量測定和雜質測定⑵ 在雜質或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質或降解產(chǎn)物的試樣進行測定，與另一個經(jīng)驗證了的或藥典方法比較結果。用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解或氧化的方法進行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑。含量測定方法應比對二法的結果，雜質檢查應比對檢出的雜質個數(shù)，必要時可采用二極管陣列檢測和質譜檢測，進行峰純度檢查。,三、專屬性,專屬性驗證常見主要問題驗證

24、方法不科學。主要是破壞性試驗條件選擇不合理，往往出現(xiàn)破壞條件太劇烈或使用破壞條件無效。破壞條件選擇參考標準：能出現(xiàn)雜質峰，主成分峰的峰面積約相當于破壞前的80～90％，并能與產(chǎn)生的雜質峰很好的分離。,四、檢測限,檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量。該驗證指標的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測能力。因此對雜質限度試驗，需證明方法具有足夠低的檢測限，以保證檢出需控制的雜質。藥品的鑒別試驗和雜質檢查方法

25、，均應通過測試確定方法的檢測限。常用的方法如下。,四、檢測限,1．非儀器分析目視法（直觀法 ）檢測限的測定是通過對一系列已知濃度被測物的試樣進行分析，并以能準確、可靠檢測被測物的最小量或最低濃度來建立。用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。,四、檢測限,2．信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與噪聲信號進行比較，計算可檢出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1時相應的濃度或注入儀器的量

26、確定檢測限。其他方法有基于工作曲線的斜率和響應的標準偏差進行計算的方法等。無論用何種方法，均應用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于檢測限，進行分析，以可靠地測定檢測限。,五、定量限,定量限系指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果應具一定準確度和精密度。定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測能力。雜質定量試驗，需考察方法的定量限，以保證含量很少的雜質能夠被準確測出。雜質和降解產(chǎn)物用定量測定方法研究時，應確定方法的定量限

27、。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時相應濃度或注入儀器的量確定定量限。,五、定量限,1、直觀法直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。定量限一般通過對一系列含有已知濃度被測物的試樣進行分析，在準確度和精密度都符合要求的情況下，來確定被測物能被定量的最小量。,五、定量限,2、信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與噪聲信號進行比較，計算出可檢出的最低濃度或量。一般可信噪比為1

28、0：1。其他方法有基于工作曲線的斜率和響應的標準偏差進行計算的方法等。無論用何種方法，均應用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于定量限，進行分析，以可靠地測定定量限。,六、線性,線性系指在設計的范圍內(nèi)，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。應在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進行測定，至少制備5份供試樣品。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再

29、用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應信號可經(jīng)數(shù)學轉換，再進行線性回歸計算。,七、范圍,范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應根據(jù)劑型和分析方法的具體應用和線性、準確度、精密度結果和要求確定。1、原料藥和制劑含量測定，范圍應為測試濃度的80%～120%；,七、范圍,2、制劑含量均勻度檢查，范圍應為測試濃度的70%～130%；3、溶出度的溶出量測定，范圍應為限度的±20%，4、

30、釋放度中如規(guī)定了限度范圍，則應為下限的-20%至上限的＋20%；5、雜質測定范圍應根據(jù)初步實測，擬訂為規(guī)定限度的±20%。如果含量測定與雜質檢查同時用百分歸一化法，則線性范圍應為雜質規(guī)定限度的-20%至含量限度（或上限）的＋20%。,八、耐用性,耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，為把方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。開始研究分析方法時就應考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應在方法中寫明。耐用性主要

31、考察方法本身對于可變試驗因素的抗干擾能力。,八、耐用性,典型的變動因素有：1、被測溶液的穩(wěn)定性，樣品的提取次數(shù)、時間等。2、液相色譜法中，流動相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流速等。,八、耐用性,3、氣相色譜法，不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔體，柱溫，進樣口和檢測器溫度等。經(jīng)試驗，應說明小的變動能否通過設計的系統(tǒng)適用性試驗，以確保方法有效。,方法再驗證,在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制

32、劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對分析方法再次進行全面或部分驗證，以保證分析方法可靠，這一過程稱為方法再驗證。 再驗證原則：根據(jù)改變的程度進行相應的再驗證。,方法再驗證,當原料藥合成工藝發(fā)生改變時，可能引入新的雜質，雜質檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要再進行驗證，以證明有關物質檢查方法能夠檢測新引入的雜質，且新引入的雜質對主成份的含量測定應無干擾。,方法再驗證,當制劑的處方組成改變、輔料變更時，可能會影響鑒別的專屬性、

33、溶出度和含量測定的準確度，因此需要對鑒別、含量測定方法再驗證。當原料藥產(chǎn)地來源發(fā)生變更時，可能會影響雜質檢查和含量測定的專屬性和準確度，因此需要對雜質檢查方法和含量測定方法進行再驗證。,方法再驗證,當質量標準中某一項目分析方法發(fā)生部分改變時，如采用高效液相色譜法測定含量時，檢測波長發(fā)生改變，則需要重新進行檢測限、專屬性、準確度、精密度、線性等內(nèi)容的驗證，證明修訂后分析方法的合理性、可行性。,方法再驗證,已有國家標準的藥品質量研究中，基

34、于申報的原料藥合成工藝、制劑處方中的輔料等一般無法保證與已上市藥品的一致性，需對質量標準中部分項目進行方法的再驗證。 方法再驗證是對分析方法的完善過程，應根據(jù)實際改變情況進行再驗證，從而保證所采用的分析方法能夠控制藥品的內(nèi)在質量。,有關方法驗證值得關注的幾個問題,1、并非每個檢測項目的分析方法都需進行所有內(nèi)容的驗證，但同時也要注意驗證內(nèi)容應充分，足以證明采用的分析方法的合理性。如雜質限度試驗一般需要驗證專屬性和檢測限，而對于精密度、線

35、性、定量限等涉及定量測定的項目，則一般不需要進行驗證。,有關方法驗證值得關注的幾個問題,2、方法驗證應注重整體性和系統(tǒng)性。例如，對于鑒別項目所需要的專屬性，一般一種分析方法不太可能完全鑒別被分析物，此時采用兩種或兩種以上分析方法可加強鑒別項目的整體專屬性。 如原料藥含量測定采用容量分析法時，由于方法本身原因，專屬性略差，但假如在雜質檢測時采用了專屬性較強的色譜法，則一般認為整個檢測方法也具有較強的專屬性。,有關方法驗證值得關注的幾個

36、問題,3、越來越多的新方法不斷被用于質量控制中，對于這些方法如何進行驗證需要具體情況具體分析，而不能機械照搬指導原則。,謝謝！,方法學驗證,,藥物分析方法的選擇和建立,一、藥物分析方法的選擇原則,2、被測組分的含量,常量組分——滴定分 析法,微量組分——儀器分析法,3、干擾物質的影響,4、測定的具體要求,我們必須根據(jù)藥物的結構、性質和含量、測定的對象和要求、存在的干擾組分情況和現(xiàn)有設備與技術條件，選用適宜的測定方法。,1、被測組分的性

37、質,二、藥物分析方法的建立,①根據(jù)該藥物的結構特征，選擇可能采用的分析方法。,②查閱文獻,藥物分析方法的選擇和建立,驗證分析項目,2 原料藥或制劑中有效成分含量測定.,3 制劑中其他成分（降解產(chǎn)物、防 腐劑等）的測定.,4 藥品溶出度、釋放度等功能檢查.,1 鑒別試驗、雜質定量或限度檢查.,藥物分析方法的驗證,驗證內(nèi)容,1 準確度2 精密度3 專屬性4 檢測線,5 定量線6 線性7 范圍8 耐用性,藥物分析方法的驗證,

38、一 精 密 度,在規(guī)定的測試條件下,同一個均勻樣品經(jīng)多次測定所得結果彼此符合程度.以標準差SD或相對標準差RSD表示.方法的精密度以三種形式表達. 1 重現(xiàn)性2 中間精密度3 重復性,藥物分析方法的驗證,一 精 密 度,1 重現(xiàn)性 (reproducibility),指在不同實驗室由不同分析者測定結果的精密度. (藥典分析方法的建立）,2 中間精密度,通過 同一實驗室,不同的時間由不同分析者或使用不同的儀器進行測定的結果的精密度.,3

39、 重復性 (repeatability),在相同條件,由一個分析者測定所得結果的精密度.,藥物分析方法的驗證,一 精密度,容量分析、重量分析法 0.3% ~ 0.5% ; 氧瓶燃燒法 ≤ 0.5% ; 紫外、原子吸收分析法 ≤ 1.5%HPLC、GC分析法 ≤ 2%TLC分析法 ≤ 2%,精密度試驗結果的RSD允許數(shù)值:,藥物分析方法的驗證,二 準確度,指用該方法測定的結果與真實值接近的程度. 一般以回收

40、率表示.要求：制劑 RSD≮2%回收率98?102%（UV、HPLC、GC) 98?102%（容量法） 體內(nèi)藥物分析80?120%,藥物分析方法的驗證,準確度 (accuracy),藥物分析方法的驗證,原料藥可用已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定結果進行比較。制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進行測定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測定，或用本法所得結果

41、與已知準確度的另一個方法測定結果進行比較。如該分析方法已經(jīng)測試并求出了精密度、線性和專屬性，準確度有時也可推算出來，可不必再做。,二 準確度,藥物分析方法的驗證 雜質定量測定的準確度,二 準確度,可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定。如不能得到雜質或降解產(chǎn)物，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典標準方法或經(jīng)過驗證的方法。在不能測得雜質或降解產(chǎn)物的響應因子或對原料藥的相對響應因子情況下，可用原料藥的響應因子。應明確表明

42、單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比（%）或面積比（%）。.,三 檢 測 限,指試樣中被測物能被測出的最低量.,檢測限 (limit of detection, LOD),藥物分析方法的驗證,1 非儀器分析目視法,用已知濃度的被測物試驗出能被可靠地檢測出最低濃度或量.,2 儀器分析信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法. 以3倍信噪比（S/N=3)相對應濃度確定檢測限量.,指樣品中被測物能被定量測定的最低量.（應具有一定的準確

43、度和精密度）,四 定量 限,確定方法: 1 儀器分析 S/N=10,定量限(limit of quantitation ,LOQ),藥物分析方法的驗證,能準確并專一測出被測物的能力.是在分析復雜樣品混合物時衡量其是否受到干擾及其程度的一種方法.,五 專 屬 性,,),專屬性系指在其他成分（如雜質、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。鑒別反應、雜質檢查、含量測定方法均應考察其專屬性。如方法不夠

44、專屬，應采用多個方法予以補充。,專屬性(specifity,在雜質或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質或降解產(chǎn)物的試樣進行測定，與另一個經(jīng)驗證了的或藥典方法比較結果。用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解，或氧化的方法進行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑。含量測定方法應比對二法的結果，雜質檢查應比對檢出的雜質個數(shù)，必要時可采用二極管陣列檢測和質譜檢測，進行純度檢查。,指在一定的濃度范圍內(nèi),測試結果與供試物濃度呈正比關系的程度.,

45、六 線 性,方法 用作圖法或計算回歸方程建立. Y=ax+b r=0.999,濃度 應包括一定梯度的5-8個濃度.對于含量測定要求濃度上限為樣品最高濃度的120%,下限為樣品最低濃度的80%,但應高于LOQ.,線性 (linearity),七 線性范圍,指利用一種方法取得精密度和準確度均符合要求的試驗結果,而且成線性的供試物濃度的變化范圍.,原料藥和制劑含量測試濃度 80%~120%制劑含量均勻度測試濃度 70

46、%~130%溶出度或釋放度的溶出量 限度±20%,藥物分析方法的驗證,目的 為常規(guī)檢驗提供依據(jù). 體現(xiàn)耐用性因素：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品的提取次數(shù)、時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流速等。氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔體，柱溫，進樣口和檢測器溫度等。,八 耐 用 性,指在測定條件有小的變動時,分析相同樣品所測得的試

47、驗結果的重現(xiàn)程度.,耐用性 (robusness,,不同分析方法對驗證參數(shù)的要求,,1 用于鑒別方法 專屬性 耐用性,2 用于原料藥中主成分或制劑中有效 成分含量測定方法除不需檢測限、定量限外其余6項,驗證方法應用,3 原料藥中雜質測定或制劑中降解產(chǎn) 物等其他雜質測定方法用于定量-除檢測限，精密度外其余6項用于限度檢查-專屬性 耐用性 檢測限,藥物分析方法的驗證,黑龍江所新藥復核的內(nèi)容,在新藥復核過程中，對申報單位提供

48、的質量標準進行復核，是新藥注冊檢驗工作的內(nèi)容之一，也是新藥注冊檢驗質量的保證，對整個質量標準的最終制定起到關鍵的作用。為更好地與申報進行交流與溝通,做好新藥注冊檢驗的復核工作，提高復核水平，特將我所新藥復核情況與大家共享。,黑龍江所新藥復核的內(nèi)容,通用名： 《中國藥品通用名稱》化學名 漢語拼音 英文名 分子式分子量,命名,性狀,根據(jù)實樣描述；及與檢查項的關聯(lián),鑒別,原料：在 說明中寫明每一個鑒別實驗（特別是化學反應）的原理，強調(diào)靈

49、敏度、專屬性。制劑：在每一個鑒別實驗中考察空白輔料的影響。,檢查,對每個新藥制訂的檢查項，首先需要考慮的是選擇這些“檢查項”是否充分，有沒有必要，同時結合含量等整個質量標準各方面的指標考察檢查項制定的合理性，其次才是對每一檢查項實驗合理性、文字規(guī)范性等各方面的內(nèi)容進行復核。,黑龍江所新藥復核的內(nèi)容,有關物質,最小檢出量：應予以考察。專一性：將樣品經(jīng)高溫或強光照射等破壞后，按有關物質的測定方法制備成相應濃度的供試品溶液，考察實驗方法的

50、專屬性 穩(wěn)定性：將供試品溶液在測定6-8小時，考察溶液是否穩(wěn)定，若供試品溶液雜質峰面積有變化或升高，則需在質量標準中寫明需“立即測定” 輔料的影響：將空白輔料照處方的量配制成供試品溶液，考察其對有關物質測定的影響。,溶出度,回收率：配制三個濃度各三份，即相當于溶出限度規(guī)定80% 100% 120%的濃度的回收率試驗溶液。輔料的影響：將空白輔料照處方的量配制成供試品溶液，考察其對溶出度測定的影響。 說明項式寫明：溶出介質的選擇、轉

51、速的選擇、取樣時間和限度的確定（根據(jù)處方篩選和溶出曲線的內(nèi)容）；測定方法的選擇及測定方法的合理性（包括本所的復核情況）等。,含量測定,說明中對方法的選擇、以及研制單位對方法的認證內(nèi)容進行描述，并進行方法的復核工作 。線性：取對照品溶液稀釋一系列 濃度，考察和對照品溶液的線性關系?；厥章剩号渲茦悠窚y定濃度80%、100%和120%的回收率試驗溶液各三份，每個點各測定三次，計算回收率。同時制備相應的空白輔料溶液，考察其影響。含量測定穩(wěn)