藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則課件

1、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則,黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)所姜連閣,藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則收載于中國(guó)藥典2010版二部附錄Ⅱ-ⅩⅨ A 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測(cè)要求。方法驗(yàn)證在分析方法建立過程中具有重要的作用，并成為質(zhì)量研究和質(zhì)量控制的組成部分。只有經(jīng)過驗(yàn)證的分析方法才能用于控制藥品質(zhì)量。方法驗(yàn)證是制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)。方法驗(yàn)證是藥物研究過程中的重要內(nèi)容。,前 言,是判

2、斷采用的分析方法是否科學(xué)、合理，是否能有效控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。從本質(zhì)上講，方法驗(yàn)證就是根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗(yàn)證內(nèi)容，并通過設(shè)計(jì)合理的試驗(yàn)來驗(yàn)證所采用的分析方法能否符合檢測(cè)項(xiàng)目的要求。對(duì)幾個(gè)分析方法的組合進(jìn)行總體的評(píng)價(jià),分析方法驗(yàn)證的目的,1、建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；2、藥品生產(chǎn)工藝變更；3、制劑的組分變更；4、對(duì)原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)。 方法驗(yàn)證理由、過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草說明或修訂說明中。,分析方法驗(yàn)證的

3、時(shí)機(jī),鑒別試驗(yàn)，雜質(zhì)定量或限度檢查（儀器或非儀器檢測(cè)方法），原料藥或制劑中有效成分含量測(cè)定，制劑中其他成分（如防腐劑等）的測(cè)定。藥品溶出度、釋放度等檢查中溶出量等測(cè)試方法。,分析方法驗(yàn)證的項(xiàng)目,1、準(zhǔn)確度； 2、精密度 重復(fù)性 中間精密度 重現(xiàn)性 3、專屬性； 4、檢測(cè)限； 5、定量限； 6

4、、線性； 7、范圍； 8、耐用性。,分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容,,1、檢測(cè)的類型2、采用的技術(shù)3、檢測(cè)方法,視具體方法擬訂驗(yàn)證的內(nèi)容,分析方法（步驟）：是指進(jìn)行分析的方式和步驟。分析方法應(yīng)給出完成每個(gè)分析試驗(yàn)所需的詳細(xì)步驟?？赡馨ü┰嚻?、對(duì)照品和試劑的配制和制備；儀器的使用說明；標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；計(jì)算公式的使用等信息，當(dāng)然，分析方法的內(nèi)容不僅限于上述信息。在實(shí)際工作中，可以對(duì)實(shí)驗(yàn)工作進(jìn)行充分的設(shè)計(jì)，使得可以同時(shí)

5、考察多個(gè)適當(dāng)?shù)尿?yàn)證項(xiàng)目，提供分析方法科學(xué)的、綜合的能力情況，比如：專屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確度和精密度。,分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容,準(zhǔn)確度：指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般以回收率（%）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。精密度：指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。 重復(fù)性：在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱中間精密

6、度：在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度 專屬性：指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性。如方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個(gè)方法予以補(bǔ)充 ，以獲得對(duì)待測(cè)物質(zhì)所需的分離能力。,分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容,檢測(cè)限：指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。藥品的鑒別試驗(yàn)和雜質(zhì)檢查方法，均應(yīng)通過測(cè)試確定方法的檢測(cè)限。常用的方法如下。 非

7、儀器分析目視法：用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。 信噪比法 ：用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。定量限：指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測(cè)定方法研究時(shí)，應(yīng)確定定量限。 常用信噪比法確定定量限。一般

8、以信噪比為10:1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定定量限。,分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容,線性：指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系。制備一系列供試樣品，至少5份。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算?！》秶褐改苓_(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析

9、方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。 　耐用性：指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為把方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。開始研究分析方法時(shí)就應(yīng)考慮其耐用性。如果測(cè)試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。,分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容,驗(yàn)證檢測(cè)項(xiàng)目的分類,1、鑒別 鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其它物質(zhì)，用于鑒別的分析方法要求具有較強(qiáng)的專屬性。2、雜質(zhì)檢查（限度試驗(yàn)、定量試驗(yàn)）

10、 雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)等。 雜質(zhì)檢查要準(zhǔn)確反應(yīng)供試品的純度特性，可分為限度試驗(yàn)和定量試驗(yàn)兩種情況。用于限度試驗(yàn)的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專屬性和檢測(cè)限。用于定量試驗(yàn)的分析方法驗(yàn)證強(qiáng)調(diào)專屬性、準(zhǔn)確度和定量限。,3、定量測(cè)定 定量測(cè)定包括含量測(cè)定、制劑的溶出度（釋放度）測(cè)定等，由于此類項(xiàng)目對(duì)準(zhǔn)確性要求較高，故所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準(zhǔn)確度和線性。4、其他特定檢

11、測(cè)項(xiàng)目。 其他特定檢測(cè)項(xiàng)目包括粒徑分布、旋光度、分子量分布等，由于這些檢測(cè)項(xiàng)目的要求與鑒別、雜質(zhì)檢查、定量測(cè)定等有所不同，對(duì)于這些項(xiàng)目的分析方法驗(yàn)證應(yīng)有不同的要求。,驗(yàn)證檢測(cè)項(xiàng)目的分類,,檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容,① 已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。② 如一種方法不夠?qū)伲捎闷渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充。③ 視具體情況予以驗(yàn)證。,1．鑒別反應(yīng) 各論中鑒別項(xiàng)目的目的就是為待測(cè)物質(zhì)的真?zhèn)舞b定提供確證信息。鑒別方法要保證具有

12、可能好的專屬性。應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。如方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個(gè)方法予以補(bǔ)充。 不含被測(cè)成分的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物（活性物質(zhì)和輔料能被區(qū)分開來），均應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。IR：結(jié)晶水、同類物質(zhì)、結(jié)晶溶劑一個(gè)物質(zhì)的紫外光譜極少能獨(dú)立成為鑒別的判斷依據(jù)。比值的專屬更強(qiáng)（有關(guān)物質(zhì)增加對(duì)UV最大吸收的影響）本鑒別方法需要使用對(duì)照品，結(jié)合原位的化學(xué)反應(yīng)，也就是在薄層展開后用適當(dāng)?shù)娘@色劑進(jìn)行顯色，可以增強(qiáng) TL

13、C鑒別法的專屬性。TLC分離系統(tǒng)，盡管為了保證藥品的鑒別試驗(yàn)，可能仍然需要對(duì)色譜條件的分離能力進(jìn)行規(guī)定。如果出于保證鑒別試驗(yàn)準(zhǔn)確的目的，在鑒別項(xiàng)下會(huì)規(guī)定分離度要求。如果適用的話，純度檢查項(xiàng)下的TLC系統(tǒng)更適于作為鑒別方法。用于鑒別試驗(yàn)的供試品溶液和對(duì)照品溶液的濃度應(yīng)適當(dāng)降低，使點(diǎn)樣量在 5~20ug。有時(shí)可能需要將某個(gè)通用檢測(cè)系統(tǒng)變更為更有區(qū)分力的檢測(cè)系統(tǒng)。,,,,,,,,,,,,,,,一、準(zhǔn)確度,準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)

14、值或認(rèn)可的參考值接近的程度。 一定的準(zhǔn)確度為定量測(cè)定的必要條件，因此涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要驗(yàn)證準(zhǔn)確度，如含量測(cè)定、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。對(duì)于制劑一般以回收率試驗(yàn)來進(jìn)行驗(yàn)證。 準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試。,一、準(zhǔn)確度,1．含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度⑴ 原料藥 可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。,一、準(zhǔn)確度,1．含量測(cè)

15、定方法的準(zhǔn)確度⑵ 制劑 可用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。,一、準(zhǔn)確度,2．雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過驗(yàn)證的方法。在不能測(cè)得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的響應(yīng)因子或?qū)υ纤幍南鄬?duì)

16、響應(yīng)因子情況下，可在線測(cè)定雜質(zhì)的相關(guān)數(shù)據(jù)，如采用二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定紫外光譜，當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應(yīng)因子近似計(jì)算雜質(zhì)含量（自身對(duì)照法）。應(yīng)明確表明單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（%）或面積比（%）。,一、準(zhǔn)確度,3．?dāng)?shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，例如，設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定。應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（%），或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相

17、對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。用于藥品的含量測(cè)定時(shí)，樣品濃度應(yīng)設(shè)定于含量100％的±20％之間；用于溶出（釋放）曲線考察時(shí)，樣品濃度應(yīng)設(shè)定于全曲線范圍的上、中、下部位。,二、精密度,精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。精密度包括：重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。含量測(cè)定和雜質(zhì)的定量測(cè)定應(yīng)考慮方法的精密度。,二、精密度,1．重復(fù)性在相同條件

18、下，由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性； 在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，例如，設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試溶液，進(jìn)行測(cè)定?；?00%的濃度水平，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。,二、精密度,2．中間精密度在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度； 為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備

19、。,二、精密度,3．重現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。,三、專屬性,專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法、有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定等均應(yīng)考察其專屬性。如方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個(gè)方法

20、予以補(bǔ)充。,三、專屬性,1．鑒別反應(yīng)應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。需確證含被分析物的供試品呈正反應(yīng)，而不含被測(cè)成分的陰性對(duì)照呈負(fù)反應(yīng)，結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物也應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。,三、專屬性,2．雜質(zhì)檢查 作為純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)確?？蓹z出被分析物中雜質(zhì)的含量，如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、有機(jī)溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有一定的專屬性。在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離

21、和檢出，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度。,三、專屬性,2．雜質(zhì)檢查在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過與另一種已證明合理但分離或檢測(cè)原理不同、或具較強(qiáng)分辨能力的方法進(jìn)行結(jié)果比較來確定?；?qū)⒐┰嚻酚脧?qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進(jìn)行破壞（制劑應(yīng)考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)和量。必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行色譜峰純度檢查。,三、專屬性,3、含量測(cè)定含量測(cè)定目的是得到供試品中被分析物的含量或

22、效價(jià)的準(zhǔn)確結(jié)果。在雜質(zhì)可獲得的情況下，對(duì)于主成分含量測(cè)定可在供試品中加入雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的供試品比較測(cè)定結(jié)果。,三、專屬性,3、含量測(cè)定在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可采用另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的或藥典方法進(jìn)行比較，對(duì)比兩種方法測(cè)定的結(jié)果。也可采用破壞性試驗(yàn)（強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進(jìn)行含量測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果。必要時(shí)進(jìn)行色譜峰純度檢查，證明含

23、量測(cè)定成分的色譜峰中不包含其他成分。,三、專屬性,2．含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定⑵ 在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)行測(cè)定，與另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的或藥典方法比較結(jié)果。用強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解或氧化的方法進(jìn)行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑。含量測(cè)定方法應(yīng)比對(duì)二法的結(jié)果，雜質(zhì)檢查應(yīng)比對(duì)檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)，必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行峰純度檢查。,三、專屬性,專屬性驗(yàn)證常見主要問題驗(yàn)證

24、方法不科學(xué)。主要是破壞性試驗(yàn)條件選擇不合理，往往出現(xiàn)破壞條件太劇烈或使用破壞條件無效。破壞條件選擇參考標(biāo)準(zhǔn)：能出現(xiàn)雜質(zhì)峰，主成分峰的峰面積約相當(dāng)于破壞前的80～90％，并能與產(chǎn)生的雜質(zhì)峰很好的分離。,四、檢測(cè)限,檢測(cè)限系指試樣中的被分析物能夠被檢測(cè)到的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。該驗(yàn)證指標(biāo)的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測(cè)能力。因此對(duì)雜質(zhì)限度試驗(yàn)，需證明方法具有足夠低的檢測(cè)限，以保證檢出需控制的雜質(zhì)。藥品的鑒別試驗(yàn)和雜質(zhì)檢查方法

25、，均應(yīng)通過測(cè)試確定方法的檢測(cè)限。常用的方法如下。,四、檢測(cè)限,1．非儀器分析目視法（直觀法 ）檢測(cè)限的測(cè)定是通過對(duì)一系列已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn)確、可靠檢測(cè)被測(cè)物的最小量或最低濃度來建立。用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。,四、檢測(cè)限,2．信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與噪聲信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算可檢出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量

26、確定檢測(cè)限。其他方法有基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算的方法等。無論用何種方法，均應(yīng)用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于檢測(cè)限，進(jìn)行分析，以可靠地測(cè)定檢測(cè)限。,五、定量限,定量限系指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測(cè)能力。雜質(zhì)定量試驗(yàn)，需考察方法的定量限，以保證含量很少的雜質(zhì)能夠被準(zhǔn)確測(cè)出。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測(cè)定方法研究時(shí)，應(yīng)確定方法的定量限

27、。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。,五、定量限,1、直觀法直觀評(píng)價(jià)可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。定量限一般通過對(duì)一系列含有已知濃度被測(cè)物的試樣進(jìn)行分析，在準(zhǔn)確度和精密度都符合要求的情況下，來確定被測(cè)物能被定量的最小量。,五、定量限,2、信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與噪聲信號(hào)進(jìn)行比較，計(jì)算出可檢出的最低濃度或量。一般可信噪比為1

28、0：1。其他方法有基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算的方法等。無論用何種方法，均應(yīng)用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于定量限，進(jìn)行分析，以可靠地測(cè)定定量限。,六、線性,線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備5份供試樣品。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再

29、用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算。,七、范圍,范圍系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)劑型和分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。1、原料藥和制劑含量測(cè)定，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%～120%；,七、范圍,2、制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70%～130%；3、溶出度的溶出量測(cè)定，范圍應(yīng)為限度的±20%，4、

30、釋放度中如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的＋20%；5、雜質(zhì)測(cè)定范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測(cè)，擬訂為規(guī)定限度的±20%。如果含量測(cè)定與雜質(zhì)檢查同時(shí)用百分歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20%至含量限度（或上限）的＋20%。,八、耐用性,耐用性系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為把方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。開始研究分析方法時(shí)就應(yīng)考慮其耐用性。如果測(cè)試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。耐用性主要

31、考察方法本身對(duì)于可變?cè)囼?yàn)因素的抗干擾能力。,八、耐用性,典型的變動(dòng)因素有：1、被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，樣品的提取次數(shù)、時(shí)間等。2、液相色譜法中，流動(dòng)相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱，柱溫，流速等。,八、耐用性,3、氣相色譜法，不同廠牌或批號(hào)的色譜柱、固定相，不同類型的擔(dān)體，柱溫，進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說明小的變動(dòng)能否通過設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以確保方法有效。,方法再驗(yàn)證,在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制

32、劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對(duì)分析方法再次進(jìn)行全面或部分驗(yàn)證，以保證分析方法可靠，這一過程稱為方法再驗(yàn)證。 再驗(yàn)證原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗(yàn)證。,方法再驗(yàn)證,當(dāng)原料藥合成工藝發(fā)生改變時(shí)，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方法的專屬性就需要再進(jìn)行驗(yàn)證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測(cè)新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對(duì)主成份的含量測(cè)定應(yīng)無干擾。,方法再驗(yàn)證,當(dāng)制劑的處方組成改變、輔料變更時(shí)，可能會(huì)影響鑒別的專屬性、

33、溶出度和含量測(cè)定的準(zhǔn)確度，因此需要對(duì)鑒別、含量測(cè)定方法再驗(yàn)證。當(dāng)原料藥產(chǎn)地來源發(fā)生變更時(shí)，可能會(huì)影響雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定的專屬性和準(zhǔn)確度，因此需要對(duì)雜質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方法進(jìn)行再驗(yàn)證。,方法再驗(yàn)證,當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中某一項(xiàng)目分析方法發(fā)生部分改變時(shí)，如采用高效液相色譜法測(cè)定含量時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)發(fā)生改變，則需要重新進(jìn)行檢測(cè)限、專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性等內(nèi)容的驗(yàn)證，證明修訂后分析方法的合理性、可行性。,方法再驗(yàn)證,已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的藥品質(zhì)量研究中，基

34、于申報(bào)的原料藥合成工藝、制劑處方中的輔料等一般無法保證與已上市藥品的一致性，需對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中部分項(xiàng)目進(jìn)行方法的再驗(yàn)證。 方法再驗(yàn)證是對(duì)分析方法的完善過程，應(yīng)根據(jù)實(shí)際改變情況進(jìn)行再驗(yàn)證，從而保證所采用的分析方法能夠控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。,有關(guān)方法驗(yàn)證值得關(guān)注的幾個(gè)問題,1、并非每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的分析方法都需進(jìn)行所有內(nèi)容的驗(yàn)證，但同時(shí)也要注意驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)充分，足以證明采用的分析方法的合理性。如雜質(zhì)限度試驗(yàn)一般需要驗(yàn)證專屬性和檢測(cè)限，而對(duì)于精密度、線

35、性、定量限等涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目，則一般不需要進(jìn)行驗(yàn)證。,有關(guān)方法驗(yàn)證值得關(guān)注的幾個(gè)問題,2、方法驗(yàn)證應(yīng)注重整體性和系統(tǒng)性。例如，對(duì)于鑒別項(xiàng)目所需要的專屬性，一般一種分析方法不太可能完全鑒別被分析物，此時(shí)采用兩種或兩種以上分析方法可加強(qiáng)鑒別項(xiàng)目的整體專屬性。 如原料藥含量測(cè)定采用容量分析法時(shí)，由于方法本身原因，專屬性略差，但假如在雜質(zhì)檢測(cè)時(shí)采用了專屬性較強(qiáng)的色譜法，則一般認(rèn)為整個(gè)檢測(cè)方法也具有較強(qiáng)的專屬性。,有關(guān)方法驗(yàn)證值得關(guān)注的幾個(gè)

36、問題,3、越來越多的新方法不斷被用于質(zhì)量控制中，對(duì)于這些方法如何進(jìn)行驗(yàn)證需要具體情況具體分析，而不能機(jī)械照搬指導(dǎo)原則。,謝謝！,方法學(xué)驗(yàn)證,,藥物分析方法的選擇和建立,一、藥物分析方法的選擇原則,2、被測(cè)組分的含量,常量組分——滴定分 析法,微量組分——儀器分析法,3、干擾物質(zhì)的影響,4、測(cè)定的具體要求,我們必須根據(jù)藥物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和含量、測(cè)定的對(duì)象和要求、存在的干擾組分情況和現(xiàn)有設(shè)備與技術(shù)條件，選用適宜的測(cè)定方法。,1、被測(cè)組分的性

37、質(zhì),二、藥物分析方法的建立,①根據(jù)該藥物的結(jié)構(gòu)特征，選擇可能采用的分析方法。,②查閱文獻(xiàn),藥物分析方法的選擇和建立,驗(yàn)證分析項(xiàng)目,2 原料藥或制劑中有效成分含量測(cè)定.,3 制劑中其他成分（降解產(chǎn)物、防 腐劑等）的測(cè)定.,4 藥品溶出度、釋放度等功能檢查.,1 鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)定量或限度檢查.,藥物分析方法的驗(yàn)證,驗(yàn)證內(nèi)容,1 準(zhǔn)確度2 精密度3 專屬性4 檢測(cè)線,5 定量線6 線性7 范圍8 耐用性,藥物分析方法的驗(yàn)證,

38、一 精 密 度,在規(guī)定的測(cè)試條件下,同一個(gè)均勻樣品經(jīng)多次測(cè)定所得結(jié)果彼此符合程度.以標(biāo)準(zhǔn)差SD或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD表示.方法的精密度以三種形式表達(dá). 1 重現(xiàn)性2 中間精密度3 重復(fù)性,藥物分析方法的驗(yàn)證,一 精 密 度,1 重現(xiàn)性 (reproducibility),指在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析者測(cè)定結(jié)果的精密度. (藥典分析方法的建立）,2 中間精密度,通過 同一實(shí)驗(yàn)室,不同的時(shí)間由不同分析者或使用不同的儀器進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果的精密度.,3

39、 重復(fù)性 (repeatability),在相同條件,由一個(gè)分析者測(cè)定所得結(jié)果的精密度.,藥物分析方法的驗(yàn)證,一 精密度,容量分析、重量分析法 0.3% ~ 0.5% ; 氧瓶燃燒法 ≤ 0.5% ; 紫外、原子吸收分析法 ≤ 1.5%HPLC、GC分析法 ≤ 2%TLC分析法 ≤ 2%,精密度試驗(yàn)結(jié)果的RSD允許數(shù)值:,藥物分析方法的驗(yàn)證,二 準(zhǔn)確度,指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值接近的程度. 一般以回收

40、率表示.要求：制劑 RSD≮2%回收率98?102%（UV、HPLC、GC) 98?102%（容量法） 體內(nèi)藥物分析80?120%,藥物分析方法的驗(yàn)證,準(zhǔn)確度 (accuracy),藥物分析方法的驗(yàn)證,原料藥可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。制劑可用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果

41、與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。如該分析方法已經(jīng)測(cè)試并求出了精密度、線性和專屬性，準(zhǔn)確度有時(shí)也可推算出來，可不必再做。,二 準(zhǔn)確度,藥物分析方法的驗(yàn)證 雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度,二 準(zhǔn)確度,可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過驗(yàn)證的方法。在不能測(cè)得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的響應(yīng)因子或?qū)υ纤幍南鄬?duì)響應(yīng)因子情況下，可用原料藥的響應(yīng)因子。應(yīng)明確表明

42、單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（%）或面積比（%）。.,三 檢 測(cè) 限,指試樣中被測(cè)物能被測(cè)出的最低量.,檢測(cè)限 (limit of detection, LOD),藥物分析方法的驗(yàn)證,1 非儀器分析目視法,用已知濃度的被測(cè)物試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出最低濃度或量.,2 儀器分析信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法. 以3倍信噪比（S/N=3)相對(duì)應(yīng)濃度確定檢測(cè)限量.,指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量.（應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確

43、度和精密度）,四 定量 限,確定方法: 1 儀器分析 S/N=10,定量限(limit of quantitation ,LOQ),藥物分析方法的驗(yàn)證,能準(zhǔn)確并專一測(cè)出被測(cè)物的能力.是在分析復(fù)雜樣品混合物時(shí)衡量其是否受到干擾及其程度的一種方法.,五 專 屬 性,,),專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法均應(yīng)考察其專屬性。如方法不夠

44、專屬，應(yīng)采用多個(gè)方法予以補(bǔ)充。,專屬性(specifity,在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)行測(cè)定，與另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的或藥典方法比較結(jié)果。用強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解，或氧化的方法進(jìn)行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑。含量測(cè)定方法應(yīng)比對(duì)二法的結(jié)果，雜質(zhì)檢查應(yīng)比對(duì)檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)，必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行純度檢查。,指在一定的濃度范圍內(nèi),測(cè)試結(jié)果與供試物濃度呈正比關(guān)系的程度.,

45、六 線 性,方法 用作圖法或計(jì)算回歸方程建立. Y=ax+b r=0.999,濃度 應(yīng)包括一定梯度的5-8個(gè)濃度.對(duì)于含量測(cè)定要求濃度上限為樣品最高濃度的120%,下限為樣品最低濃度的80%,但應(yīng)高于LOQ.,線性 (linearity),七 線性范圍,指利用一種方法取得精密度和準(zhǔn)確度均符合要求的試驗(yàn)結(jié)果,而且成線性的供試物濃度的變化范圍.,原料藥和制劑含量測(cè)試濃度 80%~120%制劑含量均勻度測(cè)試濃度 70

46、%~130%溶出度或釋放度的溶出量 限度±20%,藥物分析方法的驗(yàn)證,目的 為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù). 體現(xiàn)耐用性因素：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，樣品的提取次數(shù)、時(shí)間等。液相色譜法中典型的變動(dòng)因素有：流動(dòng)相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號(hào)的同類型色譜柱，柱溫，流速等。氣相色譜法變動(dòng)因素有：不同廠牌或批號(hào)的色譜柱、固定相，不同類型的擔(dān)體，柱溫，進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。,八 耐 用 性,指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí),分析相同樣品所測(cè)得的試

47、驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)程度.,耐用性 (robusness,,不同分析方法對(duì)驗(yàn)證參數(shù)的要求,,1 用于鑒別方法 專屬性 耐用性,2 用于原料藥中主成分或制劑中有效 成分含量測(cè)定方法除不需檢測(cè)限、定量限外其余6項(xiàng),驗(yàn)證方法應(yīng)用,3 原料藥中雜質(zhì)測(cè)定或制劑中降解產(chǎn) 物等其他雜質(zhì)測(cè)定方法用于定量-除檢測(cè)限，精密度外其余6項(xiàng)用于限度檢查-專屬性 耐用性 檢測(cè)限,藥物分析方法的驗(yàn)證,黑龍江所新藥復(fù)核的內(nèi)容,在新藥復(fù)核過程中，對(duì)申報(bào)單位提供

48、的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行復(fù)核，是新藥注冊(cè)檢驗(yàn)工作的內(nèi)容之一，也是新藥注冊(cè)檢驗(yàn)質(zhì)量的保證，對(duì)整個(gè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的最終制定起到關(guān)鍵的作用。為更好地與申報(bào)進(jìn)行交流與溝通,做好新藥注冊(cè)檢驗(yàn)的復(fù)核工作，提高復(fù)核水平，特將我所新藥復(fù)核情況與大家共享。,黑龍江所新藥復(fù)核的內(nèi)容,通用名： 《中國(guó)藥品通用名稱》化學(xué)名 漢語拼音 英文名 分子式分子量,命名,性狀,根據(jù)實(shí)樣描述；及與檢查項(xiàng)的關(guān)聯(lián),鑒別,原料：在 說明中寫明每一個(gè)鑒別實(shí)驗(yàn)（特別是化學(xué)反應(yīng)）的原理，強(qiáng)調(diào)靈

49、敏度、專屬性。制劑：在每一個(gè)鑒別實(shí)驗(yàn)中考察空白輔料的影響。,檢查,對(duì)每個(gè)新藥制訂的檢查項(xiàng)，首先需要考慮的是選擇這些“檢查項(xiàng)”是否充分，有沒有必要，同時(shí)結(jié)合含量等整個(gè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)各方面的指標(biāo)考察檢查項(xiàng)制定的合理性，其次才是對(duì)每一檢查項(xiàng)實(shí)驗(yàn)合理性、文字規(guī)范性等各方面的內(nèi)容進(jìn)行復(fù)核。,黑龍江所新藥復(fù)核的內(nèi)容,有關(guān)物質(zhì),最小檢出量：應(yīng)予以考察。專一性：將樣品經(jīng)高溫或強(qiáng)光照射等破壞后，按有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法制備成相應(yīng)濃度的供試品溶液，考察實(shí)驗(yàn)方法的

50、專屬性 穩(wěn)定性：將供試品溶液在測(cè)定6-8小時(shí)，考察溶液是否穩(wěn)定，若供試品溶液雜質(zhì)峰面積有變化或升高，則需在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中寫明需“立即測(cè)定” 輔料的影響：將空白輔料照處方的量配制成供試品溶液，考察其對(duì)有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的影響。,溶出度,回收率：配制三個(gè)濃度各三份，即相當(dāng)于溶出限度規(guī)定80% 100% 120%的濃度的回收率試驗(yàn)溶液。輔料的影響：將空白輔料照處方的量配制成供試品溶液，考察其對(duì)溶出度測(cè)定的影響。 說明項(xiàng)式寫明：溶出介質(zhì)的選擇、轉(zhuǎn)

51、速的選擇、取樣時(shí)間和限度的確定（根據(jù)處方篩選和溶出曲線的內(nèi)容）；測(cè)定方法的選擇及測(cè)定方法的合理性（包括本所的復(fù)核情況）等。,含量測(cè)定,說明中對(duì)方法的選擇、以及研制單位對(duì)方法的認(rèn)證內(nèi)容進(jìn)行描述，并進(jìn)行方法的復(fù)核工作 。線性：取對(duì)照品溶液稀釋一系列 濃度，考察和對(duì)照品溶液的線性關(guān)系?；厥章剩号渲茦悠窚y(cè)定濃度80%、100%和120%的回收率試驗(yàn)溶液各三份，每個(gè)點(diǎn)各測(cè)定三次，計(jì)算回收率。同時(shí)制備相應(yīng)的空白輔料溶液，考察其影響。含量測(cè)定穩(wěn)