2.2kb乙型肝炎病毒基因組剪接變異體特異性新蛋白的功能研究

1、f l i 0 9 2 1 5分類號：R 3 7 3 ．2 + 1 學(xué)校代碼l 1 0 3 9 2學(xué) 號t 2 0 0 4 0 2 0 0 4福建醫(yī)科大學(xué)博士研究生畢業(yè)論文2 ．2 k b 乙型肝炎病毒基因組剪接變異體特異性新蛋白的功能研究I n v e s t i g a t i o n o n f u n c t i o no f t h e n o v e l p r o t e i n e n c o d e d b yt h

2、e 2 ．2 K b s p l i c e d v a r i a n t o f h e p a t i t i sB v i r u s g e n o m e所在院( 系) ： 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院研- 究 生： 陳筑南學(xué)科( 專業(yè)) 。 病原生物學(xué)導(dǎo) 師： 林建銀教授林旭教授研究起止日期： 約0 4 年9 月至2 0 0 7 年2 月二o o 七年三月2 ．2 K b 乙型肝炎病毒基因組剪接變異體剪接特異性新蛋白的功能研究摘要H B V

3、 基因組剪接變異體( s p l i c e d v a r i a n t so fh e p a t i t i sB v i r u sg c n o m c s ) 是由H B V 前基因組R N A ( p r e g a n o m i c R N A , p g R N A ) 經(jīng)剪接并逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的亞基因組D N A ．長度為2 ．2 K b 的H B V 剪接變異體占8 0 ％以上，分為雙剪接型和單剪接型，它們可編碼剪接

4、特異性新蛋白并與病毒的持續(xù)性感染及致病性相關(guān)。本研究著眼于這兩種剪接變異體編碼的兩種不同的剪接特異性新蛋白，擬用酵母雙雜交的方法，尋找能夠與它們相互作用的細(xì)胞蛋白，從而探索它們的致病性。本研究第一部分從臨床標(biāo)本中分離獲得雙剪接型與單剪接型2 ．2 K b 乙型肝炎病毒基因組剪接變異體，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了雙剪接型剪接變異體特異性新基因( T P d s 基因) 與單剪接型剪接變異體特異性新基因( T P 船基因) 的酵母雙雜交誘餌載體p G

5、 B K T 7 - T P d s 、p G B K T 7 ．T P s s 。在酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)過程中，發(fā)現(xiàn)T P d s具有反式激活G A L 4 反應(yīng)元件的能力：而T P s s 則沒有這一功能。本研究的第二部分旨在深入探討T P d s 的反式激活作用．利用分段克隆的方法，確定了T P d s 蛋白反式激活的主要功能區(qū)域位于其中部的2 8 個氨基酸， 此2 8 個氨基酸編碼框符合p r e S l 第3 0 - - 5 7 位

6、氨基酸，從剪接體的角度闡明了具有致病意義的p r e S l 相關(guān)蛋白的第二種來源。進(jìn)一步構(gòu)建T P d s 蛋白的哺乳動物細(xì)胞表達(dá)載體p c D N A 3 ．1 ／H i s C - T P d s ，證實(shí)了該蛋白在肝細(xì)胞中對C M V 即刻早期啟動子、S V 4 0 啟動子，增強(qiáng)子也具有反式激活作用，同時還證實(shí)了該蛋白對H B V自身啟動子，增強(qiáng)子也具有刺激作用．本研究的第三部分利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩查肝細(xì)胞中與T P s s 蛋白