角蛋白基因變異與乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病的研究.pdf

1、目的：我國(guó)乙型肝炎病毒(HBV)感染發(fā)病率高，嚴(yán)重危害國(guó)人健康。HBV感染有明顯的種族傾向和家族聚集性，遺傳因素可能是重要原因之一。角蛋白(keratin，K)具有重要的肝細(xì)胞保護(hù)功能，研究已證明角蛋白基因變異是多種肝病發(fā)病的危險(xiǎn)因素而且與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)，但其與HBV相關(guān)性肝病的關(guān)系尚未明確。本研究擬采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)及DNA直接測(cè)序的方法分析中國(guó)人HBV相關(guān)性肝病中角蛋白(K8)兩個(gè)變異位點(diǎn)

2、(Y54H和G62C)及其與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系，探討角蛋白基因變異與HBV相關(guān)性肝病的關(guān)系，旨在為HBV相關(guān)性肝病的發(fā)病機(jī)制提供線索，為開辟新的基因治療途徑奠定理論基礎(chǔ)，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。研究對(duì)象：病例組：HBV相關(guān)性肝病組300例，包括無(wú)癥狀HBV攜帶者(AHC)62例、慢性乙型肝炎(CHB)94例、乙肝肝硬化(HBLC)51例及原發(fā)性肝癌(PLC)93例。病人來源為我院消化內(nèi)科及肝膽外科門診、住院病例。對(duì)照組：300例，來自同期我

3、院體檢中心正常健康體檢者。
　　 方法：㈠入組標(biāo)準(zhǔn)：①病例組：AHC、CHB、HBLC組符合2005年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)和感染病學(xué)分會(huì)發(fā)布的《慢性乙型肝炎防治指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。PLC組存在HBV標(biāo)志物陽(yáng)性，且經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)；②對(duì)照組：為本院體檢中心健康體檢患者，HBV標(biāo)志物檢測(cè)陰性。㈡排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他肝炎病毒感染性肝病、自身免疫性肝病、遺傳代謝性肝病等；②有肝內(nèi)外膽管結(jié)石、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌及其他膽管疾病者

4、；③酗酒者或藥物濫用者。㈢血液樣本收集與處理。抽取研究對(duì)象外周靜脈血2ml于EDTA抗凝管中，于-20℃保存，提取全血DNA。㈣實(shí)驗(yàn)方法：①參照既往研究設(shè)計(jì)涵蓋國(guó)外報(bào)道的角蛋白K8常見變異位點(diǎn)(Y54H和G62C)的引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增目的片段；②根據(jù)已知變異位點(diǎn)選取限制性內(nèi)切酶，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行RFLP分析；③從已提取的病例組及對(duì)照組DNA中各隨機(jī)抽取5例行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序分析。㈤統(tǒng)計(jì)處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)

5、行統(tǒng)計(jì)，P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：⑴病例組和對(duì)照組的性別、年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。⑵乙型肝炎病毒相關(guān)性肝病(無(wú)癥狀乙肝病毒攜帶者、慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化及原發(fā)性肝癌組)與正常對(duì)照組均未檢測(cè)到角蛋白K8Y54H或G62C變異。
　　 結(jié)論：本研究采用PCR-RFLP及DNA直接測(cè)序方法分析K8 Y54H及G62C兩變異位點(diǎn)，未發(fā)現(xiàn)異常，可能與樣本量較小及未進(jìn)行全基因分析有關(guān)，也提示國(guó)人乙型肝