hbvtg小鼠原代肝細(xì)胞培養(yǎng)及hbvhlaa2.1小鼠的初步應(yīng)用

1、南方醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文HBV-Tg小鼠原代肝細(xì)胞培養(yǎng)及HBV-HLA-A2.1小鼠的初步應(yīng)用姓名：陶鑫申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：傳染內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：孔祥平201106中文摘要適的動(dòng)物模型，而影響對(duì)其評(píng)價(jià)。所以本實(shí)驗(yàn)室制備了H B V ／H L A - A 2 ．1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠，希望能夠解決乙肝治療性疫苗臨床前研究的難題。目 的一、建立H B V 轉(zhuǎn)基因小鼠( H B V - T g 小鼠) 原代肝細(xì)胞的分離、培養(yǎng)方法，并觀察酒精對(duì)H

2、B V - T g 小鼠原代肝細(xì)胞的損傷敏感性和對(duì)H B s A g 分泌的影響。二、觀察特異性免疫多肽對(duì)H B V ／H L A - A 2 ．1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠( 冊(cè)ⅧL A ．A 2 ．1d T g 小鼠) 特異性免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)作用和對(duì)病毒學(xué)指標(biāo)H B s A g 、H B V - D N A 的影響。方法一、采用優(yōu)化改良的兩步灌流法分離培養(yǎng)H B V - T g 小鼠與野生型B a l b ／e 小鼠的原代肝細(xì)胞；觀察細(xì)胞鋪板7

3、天內(nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài)，并檢測(cè)H B V - T g 小鼠原代肝細(xì)胞培養(yǎng)上清的白蛋白、尿素、乳酸脫氫酶、H B s A g 、H B V - D N A 的分泌及表達(dá)情況；用酒精做為氧化應(yīng)激損傷物質(zhì)，觀察對(duì)H B V - T g 小鼠與野生型B a l b ／e 小鼠的原代肝細(xì)胞的損傷敏感性差異，并觀察酒精對(duì)H B V - T g 小鼠H B s A g 的影響情況。二、用乙肝特異性表位肽皮下免疫H B V - T g 、H L A - A 2

4、 ．1 、H B V ／H L A - A 2 ．1d T g三種轉(zhuǎn)基因小鼠，一段時(shí)間后觀察小鼠肝臟組織學(xué)損傷改變，脾細(xì)胞分泌I F N - 丫分泌情況和脾細(xì)胞中C D 3 + 、C D 4 + 、C D 8 + 細(xì)胞比例。并動(dòng)態(tài)觀察小鼠血清H B s A g 、H B V - D N A 的表達(dá)情況。結(jié)果一、本實(shí)驗(yàn)室采用改良的兩步灌注法，對(duì)乙肝轉(zhuǎn)基因小鼠原代肝細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，我們不僅能夠成功分離并培養(yǎng)了H B V - T g 小鼠原代肝