去氫表雄酮的生物法羥基化修飾研究.pdf

1、1α-羥基去氫表雄酮(1α-hydroxy dehydroepiandrosterone)是用于合成活性維生素D3及其類似物的一個重要的中間體?；钚跃S生素D3作用于多種靶組織,生理作用也多種多樣,廣泛用于治療骨質疏松、甲狀旁腺亢進(腎衰)、牛皮癬、癌癥以及免疫疾病等。在由去氫表雄酮半化學合成活性維生素D3類藥物的過程中,去氫表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)的1α-羥基化是首要步驟,也是最關鍵的步驟之一。<

2、br>　　 本文采用微生物轉化的方法對去氫表雄酮進行1α-羥基化修飾。
　　 首先采用富集培養(yǎng)技術和梯度底物濃度定向篩選技術從土壤中篩選出能轉化去氫表雄酮為1α-羥基去氫表雄酮的菌株。通過形態(tài)學及分子生物學手段對該菌株進行了鑒定,確定該菌為青霉屬的斜臥青霉。對轉化產物的結構進行確認,證實了轉化產物為1α-羥基化去氫表雄酮。
　　 通過紫外誘變等手段對篩選出的菌株進行誘變處理,通過3輪紫外誘變得到了一株轉化率較高且遺傳較

3、穩(wěn)定的菌株。
　　 對ph-13的發(fā)酵和轉化條件的進行了研究,結果表明種子培養(yǎng)基的最適碳氮源分別為葡萄糖、酵母浸粉；轉化培養(yǎng)基的最佳碳氮源分別為蔗糖和硝酸鈉。孢子粉接到種子培養(yǎng)基中的最佳濃度為5×107個/mL。
　　 對ph-13轉化去氫表雄酮1α-羥基化工藝優(yōu)化后,得到了最佳轉化培養(yǎng)基配方:蔗糖為4.75g/L,硝酸鈉為3.69g/L,硫酸鎂為0.3 g/L,硫酸錳為0.0001g/L,硫酸亞鐵為0.0001 g/L