tim3對h.pylori作用的鼠源性巨噬細胞內(nèi)tlr4信號通路的影響

1、學位論文獨創(chuàng)性聲明學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名( 手寫) ： 簽字F j 期： 弼 年碾月D 6 同學位論文版權使用授權書本學

2、位論文作者完全了解直昌太堂有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權南昌大學可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編本學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所和中國學術期刊( 光盤版) 電子雜志社將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》和《中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫》中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡向社會公眾

3、提供信息服務。( 保密的學位論文在解密后適用本授權書) ／ 刀學讎文儲簽名( 瑚：徽 新簽名( 瑪：擲≯ 、l簽字日期：抓年。6 月o ；o n 簽字同期：溯3 年D 6 月D 6 日摘要B 組：細菌和細胞M O I 值為5 0C 組：細菌和細胞M O I 值為1 0 0D 組 ：細菌和細胞M O I 值為2 0 0細菌與細胞培養(yǎng)1 2 小時后收集細胞。( 3 ) T i m - 3 重組真核表達質(zhì)粒的構建、鑒定①分離小鼠脾臟單個核細胞

4、，設計針對T i m 一3 基因的特異性引物并擴增目的基因。②將T i m 一3 擴增產(chǎn)物插入到p L V X —I R E S —Z s G r e e n l 載體，構建重組質(zhì)粒。擴增、提取重組質(zhì)粒，并采用酶切和測序鑒定。( 4 ) T i m - 3 重組真核表達質(zhì)粒的真核表達采用陽脂質(zhì)體轉染技術將p L V X —I R E S ～Z s G r e e n —T i m 一3 轉入小鼠巨噬細胞，觀察有無熒光及熒光強度，并收集細

5、胞檢測T i m - 3m R N A 及蛋白表達。( 5 ) 擐p y l o r i 作用對T i m - 3 過表達巨噬細胞T i m - 3 和T L R 4 信號通路及炎性細胞因子分泌的影響@ T i m - 3 基因轉染②實驗分組以H p S S l ( M O I = 1 0 0 ) 作用小鼠巨噬細胞，實驗分組如下：對照組1 ：細胞+ 轉染試劑對照組2 ：細胞+ 轉染試齊U + T i m - 3 質(zhì)粒對照組實驗組實驗組實

6、驗組細胞+ 轉染試劑+ 空質(zhì)粒細胞+ 轉染試劑+ 丘p y J o r i細胞+ 轉染試劑+ T i m 一3 質(zhì)粒+ 丘p y ] o r i細胞+ 轉染試劑+ 空質(zhì)粒+ 丘p y l o r i丘p y ] o r i 作用1 2 d , 時后收集細胞和培養(yǎng)上清。( 6 ) 檢測方法：①采用M T T 法檢N Y ．p y l o r i 對巨噬細胞增殖的影響②采用R T —P C R 的方法檢測各組細胞p 勺T i m - 3 、