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1、南開大學(xué)碩士學(xué)位論文Ⅰ型皰疹病毒毒力蛋白ICP34.5與細(xì)胞自噬的相關(guān)性研究姓名:田報(bào)春申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:曹又佳2012-05A b s t r a c tA b s t r a c tA u t o p h a g y i sa c o n s e r v e d p a t h w a y t h a t f u n c t i o n si n a l le u k a r y o t i co
2、 r g a n i s m st om a i n t a i n c e l l u l a r h o m e o s t a s i s .T h e a u t o p h a g y p a t h w a y t a r g e t s f o r l y s o s o m a ld e g r a d a t i o n b o t h c e l l u l a r c y t o p l a s m i c c o
3、 n s t i t u e n t s ,s u c h a s d a m a g e d o r a g e do r g a n e l l e s ,p r o t e i n sa n dp r o t e i na g g r e g a t e s ,a sw e l la sm i c r o b i a li n v a d e r s ,i n c l u d i n gv i r u s e s .A f t e
4、 r v i r u s i n f e c t i o n ,d s R N A s t r u c t u r e s a c t i v a t e t h ei n t e r f e r o n i n d u c i b l ea n t i v i r a l m o l e c u l e ,P K R ,w h i c h i n d u c e s a u t o p h a g y .P K Rc a n p h
5、o s p h o r y l a t e t h et r a n s l a t i o ni n i t i a t i o n f a c t o re l F 2 a l p h aa n dt h e ns t o pt h ep r o t e i n s y n t h e s i sa n dt h u si n h i b i tt h ev i r u sr e p l i c a t i o n .T h i s
6、i s o n eo f t h er o l e st h a ti n t e r f e r o nd e f e n dt h ev i r u si n v a s i o n .T h e n e u r o v i r u l e n c ep r o t e i n 7 13 4 .5o f h e r p e s s i m p l e xv i r u s t y p eI ( H S V - 1 )p l a y
7、s av e r yi m p o r t a n tr o l ei nt h ep a t h o g e n i c i t yo ft h ev i r u s a n d i nh o s t d e f e n s ea g a i n s t v i r u s e s .T h e I C P 3 4 .5 c a n b i n d t h e p r o t e i n p h o s p h o t a s e 1
8、 ( P P 1 ) a n dd e p h o s p h o r y l a t e t h e p h o r s p h o r y l a t e d e l F 2 a l p h a t o r e s t a r t t h e p r o t e i n s y n t h e s i s .I C P 3 4 .5 a l s oa n t a g o n i z e st h e a u t o p h a g
9、yp r o t e i nB e c l i n 1 w h i l e v i r a l B c l - 2f a m i l ym e m b e r s a n t a g o n i z e B e c l i n1 t os u p p r e s sa u t o p h a g y i n d u c t i o n .V i r a ln u c l e i c a c i d s a r ed e l i v e
10、r e db ya u t o p h a g o s o m e s t o e n d o s o m e sc o n t a i n i n gt o l l l i k er e c e p t o r ( T L R 7 ) ,w h i c h i n d u c e st y p e1 i n t e r f e r o n ( I F N ) p r o d u c t i o n .I no u re x p e r
11、 i m e n t s ,w ei n f e c t e dt h r e ed i f f e r e n ts o u r c ec e l l l i n e sb yH S V - 1 a n dd e t e c ta u t o p h a g y r e l a t e dp r o t e i nL C 3 I Ib yW e s t e r n b l o t .C o m p a r e dw i t ht h
12、ei n f e c t i o no fI C P 3 4 .5 - d e f i c i e n tv i r u s ( R 3 6 1 6 ) ,w i l d - t y p eH S V - 1 c a r li n c r e a s es e l f - e x p r e s s i o no fa u t o p h a g yr e l a t e dp r o t e i nL C 3 I Id u r i n
13、 gas h o r tp e r i o d .T r a n s f e c t i o ne x p e r i m e n t so fe x o g e n o u s I C P 3 4 .5a l s o p r o v e d t h es a m e r e s u l t .T h e nw ec l o n e dt h e I C P 3 4 .5d e l e t i o nm u t a n tw h i c
14、 hm i s s i n gt h eb i n d i n gm o t i fw i t hB e c l i n l i n t oe x p r e s s i o nv e c t o rt h r o u g h t h eO v e r l a p P C R .I n t h ef u r t h e rs t u d yo fI C P 3 4 .5 a n d a u t o p h a g y , w ef o
15、u n d t h a t t h e i n c r e a s e d o fL C 3 I Ie x p r e s s i o n w h i c hi n d u c e d b yI C P 3 4 .5 i s n o te n t i r e l yd e p e n d e n to nt h ec o m b i n a t i o nw i t ht h eB e c l i n l ,b u t a f f e
16、c t e db y b i n d i n g P P 1 a n d e l F 2 a .W e c l a i m t h a tI C P 3 4 .5c a n i n d u c et h ei n c r e a s e do f L C 3 I I e x p r e s s i o n d u r i n gH S V 二1i n f e c t i o n .I tw i l lb e u s e f u l t
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