Ⅰ型單純皰疹病毒ICP0蛋白與組蛋白乙酰轉移酶PCAF的分子間相互作用研究.pdf

1、作為I型單純皰疹病毒(HSV-1)的一種立即早期基因產物，感染性細胞多肽0(Infectedcellpolypeptide0，ICPO)不僅與宿主細胞間存在復雜的相互作用，而且在HSV-1的裂解性和潛伏性感染過程中發(fā)揮著重要的調節(jié)功能。已經發(fā)現ICPO能夠與多種細胞蛋白如ND10結構、著絲粒蛋白CENP-C、轉錄延伸因子EF-1δ、細胞周期素cyclinD3、泛素特異性蛋白酶USP7、DNA依賴性蛋白激酶DNA-PK以及II類組蛋白去乙

2、酰化酶相互作用，表明它與宿主細胞新陳代謝的諸多方面密切相關。此外，ICPO對HSV-1三類基因(立即早期、早期和晚期基因)的表達以及許多異源性的病毒或細胞啟動子強大的反式激活能力尤其引人關注，然而由于ICPO不結合DNA，除了BMAL1以外也不結合任何已知的轉錄因子，所以其確切的轉錄激活機制至今尚不十分清楚。由于表觀遺傳效應在基因表達調控過程中的重要性，因此有理由推測:HSV-1可能會通過ICPO來利用細胞內的轉錄調控機制，從而滿足其在

3、宿主細胞內復制和增殖過程的需要。
　　 本研究提供強有力的證據表明:ICPO與組蛋白乙酰轉移酶PCAF間存在著物理性和功能性的相互作用。首先，我們通過熒光共定位、酵母雙雜交和免疫共沉淀實驗發(fā)現，ICPO分子中一個重要的功能區(qū)--環(huán)指區(qū)介導了ICPO與PCAF間特異性的相互作用。其次，免疫沉淀物組蛋白乙酰轉移酶活性分析(IP-HAT)結果顯示:ICPO沉淀物具有較強的HAT活性；在PCAF過度表達的情況下，ICPO沉淀物的HAT活

4、性更是顯著增強。在瞬時轉染分析中，全長ICPO和PCAF能夠協(xié)同促進攜帶HSV-1立即早期、早期和晚期基因啟動子的CAT報告基因表達。與此相反，缺失了大部分環(huán)指區(qū)的ICPO不僅自身無法激活基因表達，而且喪失了與PCAF的協(xié)同能力。此外，RT-PCR結果表明，盡管全長ICPO對細胞內抗凋亡蛋白Bcl-xL、Bcl-2和管家基因β-actin的轉錄沒有影響，但它能夠增強細胞內P21和糖蛋白激素亞單位a(glycoprotein hormon

5、es alpha polypeptide，CGA)基因的轉錄。而環(huán)指區(qū)突變的ICPO對上述五種基因的表達均沒有作用。利用染色質免疫沉淀技術(ChIP)，我們進一步發(fā)現:三類HSV-1啟動子控制的CAT報告基因和兩種胞內基因(P21、CGA)受ICPO作用后轉錄能力的增強，實際上至少部分是由于這些基因啟動子區(qū)組蛋白H3的乙?；潭仍黾铀隆?br>　　 基于上述實驗結果的一種假設是:為了促進HSV-1基因和部分胞內基因的表達，ICPO可