應(yīng)用rapd技術(shù)進(jìn)行菜心brassicacampestrisl.ssp.chinensisvar.utilistsenetlee種質(zhì)遺傳多樣性的研究

1、Y 9 0 1 5 6 2單位代碼! Q §3 §學(xué)號(hào)—$ 2 0 0 —3 6 6 8西南蟲(chóng)謦碩士學(xué)位論文應(yīng)用R A P D 技術(shù)進(jìn)行菜一心( B r a s s i c a c a m p e s t r i sL ．s s p ．c h i n e n s i sv a t ' ．u t i l i sT s e n e t L e e ) 種質(zhì)遺傳多樣性的研究論文作者：王麗指導(dǎo)教師：?jiǎn)虗?ài)民教授孫敏教授

2、學(xué)科專(zhuān)業(yè)：植物學(xué)研究方向：植物生物學(xué)與生物技術(shù)提交論文日期：2 0 0 6 年5 月2 0 日論文答辯日期：2 0 0 6 年6 月1 0 日學(xué)位授予單位：西南大學(xué)中國(guó)·重慶2 0 0 6 年5 月2 0 日R A P D 帶譜對(duì)實(shí)驗(yàn)程序和條件的變化很敏感，因而使R A P D 實(shí)驗(yàn)條件標(biāo)準(zhǔn)化就非常重要。對(duì)影響R A P D 擴(kuò)增反應(yīng)的諸多因子逐一進(jìn)行優(yōu)化，最終建立了一套適合菜心的R A P D 反應(yīng)體系：在2 5 t x L

3、 的反應(yīng)體系中含有O ．8 U 的T a q 酶，0 ．2 8g m o l ／Lp r i m e r ，3 0n g 的D N A ，2 ．0 m m o l ／LM g ”，O ．2 0 m m o l ／L d N T P s 。P C R 反應(yīng)參數(shù)為9 4 ℃5 m i n ；9 4 ℃l m i n ，3 6 ℃1 m i n ，7 2 ℃2 m i n ，3 7 個(gè)循環(huán)；7 2 ℃延伸1 0 m i n 。3 ．多態(tài)性引物

4、的篩選以6 個(gè)具有代表性的栽培品種為材料，從8 0 個(gè)引物中篩選出9 個(gè)能擴(kuò)增出多態(tài)性條帶的引物( s 2 、S 1 8 、$ 2 7 、$ 2 9 、$ 3 0 、$ 4 0 、$ 5 4 、$ 5 7 、$ 6 1 ) 。它們共擴(kuò)增出4 9 條穩(wěn)定的條帶，多態(tài)性條帶數(shù)為2 2 條，占擴(kuò)增總片段數(shù)的4 4 ．9 ％，呈現(xiàn)出豐富的多態(tài)性。4 ．菜心遺傳多樣性分析用篩選出的9 個(gè)引物對(duì)D N A 樣品進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，得到了清晰的R A P

5、D 擴(kuò)增圖譜，并對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行聚類(lèi)分析，將3 1 個(gè)供試材料按親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近分為A 、B 兩大類(lèi)，其中3 個(gè)小白菜、早熟黃葉、早熟油青、中熟油青、中熟特青中的益農(nóng)7 0 天特青、遲熟特青中的特青遲心4 號(hào)屬于B 大類(lèi)，其余品種均屬于A 兩大類(lèi)。A 、B 兩大類(lèi)之間的遺傳距離較小，表明這兩大類(lèi)菜心品種之間的遺傳差異較小。A 類(lèi)又可分為A 1 、A 2 兩大組，B 類(lèi)可分為B 1 、B 2 兩大組。按照栽培季節(jié)分類(lèi)同類(lèi)菜心品種分屬于不同的組