日本血吸蟲pcdna3.1sjpgk核酸疫苗的構(gòu)建及其保護(hù)性免疫的初步研究

1、南華大學(xué)碩士學(xué)位論文日本血吸蟲pcDNA3.1-SjPGK核酸疫苗的構(gòu)建及其保護(hù)性免疫的初步研究姓名：梁瑜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：肖建華20030501粱 瑜 南華人學(xué)同等學(xué)力人員碩t ：學(xué)位論文日本血吸蟲p c D N A 3 ．1 - S j P G K 核酸疫苗的構(gòu)建及其保護(hù)性免疫作用的初步研究C o n s t r u c t i n g o f t h eN u c l e i c A c i d V a

2、c c i n e o f p c D N A 3 ．1 一S j P G Ka n d S t u d y i n g t h e P r o t e c t i v e I m m u n i t y I n d u c e d b y i ti n M i c e病原生物學(xué)專業(yè)研究生：梁瑜 指導(dǎo)教師：肖建華教授中文摘要目的；擴(kuò)增編碼F 1 本血吸蟲中國大陸株磷酸甘油酸激酶( S c h i s t o s o f l ／c aj

3、a p o n i c u m p h o s p h o g l y c e r a t e k i n a s e S j P G K ，C h i n e s e s l ，r a i l l ) 的基因片段并測(cè)序；構(gòu)建p c D N A 3 ．卜s j l ，G K 核酸疫苗并免疫B A I ，B ／c 小鼠，初步研究i = 幺j 核酸疫苗對(duì)B A L B ／c 小鼠誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫作用，為同本血吸蟲病疫萄研究提供候選抗原分!

4、f 及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：用P C G E N E 中的引物設(shè)計(jì)軟件自行設(shè)計(jì)引物。收集H 本咀吸蟲成蟲，用T R I Z O L 試劑提取其總R N A ，通過逆轉(zhuǎn)錄～聚合酶鏈反應(yīng)( R T —P C R ) 法特異性擴(kuò)增S j P G K 基因片段，將其與p M D l 8 一T 載體連接，經(jīng)藍(lán)白篩選、雙酶切分析和P C R 鑒定后，將得到的陽性克隆進(jìn)行D N A 序列測(cè)定和分析，并與曼氏血吸蟲磷酸甘油酸激酶基因( S m P G K )

5、 進(jìn)行同源性比較；然后將其D N A 序列按指定的格式提交到G e n B a n k ，申請(qǐng)G e n B a n k 序列號(hào)。s L i I ) G K 基因片段亞克隆入p c D N A 3 ．1 真核表達(dá)載體·’h 用含氨芐的L B 培養(yǎng)基篩選、P C R 及測(cè)序鑒定；構(gòu)建的p c D N A 3 ．卜s j l ) G K 重組質(zhì)粒經(jīng)火量擴(kuò)增后，將其注射到B A I 。B ／c 小鼠后腿股四頭肌肌肉組織中，每2 周免