日本血吸蟲pcdna3.1sjpgk核酸疫苗的構建及其保護性免疫的初步研究

1、南華大學碩士學位論文日本血吸蟲pcDNA3.1-SjPGK核酸疫苗的構建及其保護性免疫的初步研究姓名：梁瑜申請學位級別：碩士專業(yè)：病原生物學指導教師：肖建華20030501粱 瑜 南華人學同等學力人員碩t ：學位論文日本血吸蟲p c D N A 3 ．1 - S j P G K 核酸疫苗的構建及其保護性免疫作用的初步研究C o n s t r u c t i n g o f t h eN u c l e i c A c i d V a

2、c c i n e o f p c D N A 3 ．1 一S j P G Ka n d S t u d y i n g t h e P r o t e c t i v e I m m u n i t y I n d u c e d b y i ti n M i c e病原生物學專業(yè)研究生：梁瑜 指導教師：肖建華教授中文摘要目的；擴增編碼F 1 本血吸蟲中國大陸株磷酸甘油酸激酶( S c h i s t o s o f l ／c aj

3、a p o n i c u m p h o s p h o g l y c e r a t e k i n a s e S j P G K ，C h i n e s e s l ，r a i l l ) 的基因片段并測序；構建p c D N A 3 ．卜s j l ，G K 核酸疫苗并免疫B A I ，B ／c 小鼠，初步研究i = 幺j 核酸疫苗對B A L B ／c 小鼠誘導的保護性免疫作用，為同本血吸蟲病疫萄研究提供候選抗原分!

4、f 及實驗依據(jù)。方法：用P C G E N E 中的引物設計軟件自行設計引物。收集H 本咀吸蟲成蟲，用T R I Z O L 試劑提取其總R N A ，通過逆轉(zhuǎn)錄～聚合酶鏈反應( R T —P C R ) 法特異性擴增S j P G K 基因片段，將其與p M D l 8 一T 載體連接，經(jīng)藍白篩選、雙酶切分析和P C R 鑒定后，將得到的陽性克隆進行D N A 序列測定和分析，并與曼氏血吸蟲磷酸甘油酸激酶基因( S m P G K )

5、 進行同源性比較；然后將其D N A 序列按指定的格式提交到G e n B a n k ，申請G e n B a n k 序列號。s L i I ) G K 基因片段亞克隆入p c D N A 3 ．1 真核表達載體·’h 用含氨芐的L B 培養(yǎng)基篩選、P C R 及測序鑒定；構建的p c D N A 3 ．卜s j l ) G K 重組質(zhì)粒經(jīng)火量擴增后，將其注射到B A I 。B ／c 小鼠后腿股四頭肌肌肉組織中，每2 周免