日本血吸蟲童蟲細(xì)胞的來源鑒定及保護(hù)性免疫研究.pdf

1、目的:探討組織化學(xué)染色法用以鑒定血吸蟲體外培養(yǎng)細(xì)胞來源或種類的可能性;觀察用血吸蟲童蟲活細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的保護(hù)性免疫效果.方法:采用日本血吸蟲肝期童蟲,經(jīng)消化處理獲取細(xì)胞作為形態(tài)學(xué)分析鑒定和保護(hù)性免疫研究.首先,取童蟲細(xì)胞制作涂片和用成蟲作組織切片,比較觀察用PAS、硫堇、Grimeliu's嗜銀、VG、TB和HE 6種組織化學(xué)染色法對細(xì)胞和組織的顯色特征來鑒定細(xì)胞種類和來源.與此同時(shí),采用日本血吸蟲肝期童蟲活細(xì)胞和蟲體組織,在未加佐劑

2、條件下分別接種昆明小鼠,每組10只,每隔兩周接種1次,共4次,末次接種后第7d攻擊感染血吸蟲尾蚴30條/鼠,感染后第42d解剖小鼠,與對照組比較檢測和分析蟲體發(fā)育率和卵內(nèi)毛蚴成熟率、鼠肝組織內(nèi)蟲卵肉芽腫大小、特異性抗體水平和IgG2a/IgG1亞類比值以及細(xì)胞抗原的免疫特性.結(jié)果:童蟲細(xì)胞類別鑒定結(jié)果顯示:根據(jù)6種組織化學(xué)方法染色特征,并通過細(xì)胞與蟲體組織染色定位比較觀察證實(shí),除肥大細(xì)胞(TB染色)未在組織中發(fā)現(xiàn)外,其他細(xì)胞的染色結(jié)果均

3、與成蟲組織染色定位相一致.保護(hù)性免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:細(xì)胞接種組和蟲體接種組分別與PBS注射組比,其蟲體發(fā)育率分別下降67.6％％和46.3％,其中細(xì)胞接種組比蟲體接種組的蟲體下降為39.66％;肝組織中蟲卵數(shù)(LEPG)在細(xì)胞接種組和蟲體接種組中分別減少95.4％和64.8％,細(xì)胞接種組比蟲體接種組的LEPG下降為87.1％;肝蟲卵肉芽腫大小和肝蟲卵內(nèi)毛蚴成熟率顯著低于蟲體接種組和對照組;特異性IgG2a/IgG1比值≥2,但總抗體水平低

4、于蟲體接種組;體外殺傷試驗(yàn)結(jié)果在各組間均無差異;感染鼠血清與細(xì)胞抗原反應(yīng)未見明顯識別條帶,細(xì)胞抗原中僅能被細(xì)胞免疫血清識別的抗原為36kDa~38kDa組分.結(jié)論:1.證明用PAS、尼氏體、Grimeliu's、VG和TB五種染色法結(jié)合HE染色的形態(tài)學(xué)觀察可以作為鑒定血吸蟲體外培養(yǎng)細(xì)胞來源或類別的方法,且具有簡單和快速的特點(diǎn);2.用血吸蟲童蟲活細(xì)胞作保護(hù)性免疫實(shí)驗(yàn)的初步結(jié)果證明,在不加佐劑條件下蟲體細(xì)胞可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生顯著的抗攻擊感染免疫