日本血吸蟲童蟲細胞的來源鑒定及保護性免疫研究.pdf

1、目的:探討組織化學染色法用以鑒定血吸蟲體外培養(yǎng)細胞來源或種類的可能性;觀察用血吸蟲童蟲活細胞誘導小鼠產(chǎn)生的保護性免疫效果.方法:采用日本血吸蟲肝期童蟲,經(jīng)消化處理獲取細胞作為形態(tài)學分析鑒定和保護性免疫研究.首先,取童蟲細胞制作涂片和用成蟲作組織切片,比較觀察用PAS、硫堇、Grimeliu's嗜銀、VG、TB和HE 6種組織化學染色法對細胞和組織的顯色特征來鑒定細胞種類和來源.與此同時,采用日本血吸蟲肝期童蟲活細胞和蟲體組織,在未加佐劑

2、條件下分別接種昆明小鼠,每組10只,每隔兩周接種1次,共4次,末次接種后第7d攻擊感染血吸蟲尾蚴30條/鼠,感染后第42d解剖小鼠,與對照組比較檢測和分析蟲體發(fā)育率和卵內毛蚴成熟率、鼠肝組織內蟲卵肉芽腫大小、特異性抗體水平和IgG2a/IgG1亞類比值以及細胞抗原的免疫特性.結果:童蟲細胞類別鑒定結果顯示:根據(jù)6種組織化學方法染色特征,并通過細胞與蟲體組織染色定位比較觀察證實,除肥大細胞(TB染色)未在組織中發(fā)現(xiàn)外,其他細胞的染色結果均

3、與成蟲組織染色定位相一致.保護性免疫實驗結果顯示:細胞接種組和蟲體接種組分別與PBS注射組比,其蟲體發(fā)育率分別下降67.6％％和46.3％,其中細胞接種組比蟲體接種組的蟲體下降為39.66％;肝組織中蟲卵數(shù)(LEPG)在細胞接種組和蟲體接種組中分別減少95.4％和64.8％,細胞接種組比蟲體接種組的LEPG下降為87.1％;肝蟲卵肉芽腫大小和肝蟲卵內毛蚴成熟率顯著低于蟲體接種組和對照組;特異性IgG2a/IgG1比值≥2,但總抗體水平低

4、于蟲體接種組;體外殺傷試驗結果在各組間均無差異;感染鼠血清與細胞抗原反應未見明顯識別條帶,細胞抗原中僅能被細胞免疫血清識別的抗原為36kDa~38kDa組分.結論:1.證明用PAS、尼氏體、Grimeliu's、VG和TB五種染色法結合HE染色的形態(tài)學觀察可以作為鑒定血吸蟲體外培養(yǎng)細胞來源或類別的方法,且具有簡單和快速的特點;2.用血吸蟲童蟲活細胞作保護性免疫實驗的初步結果證明,在不加佐劑條件下蟲體細胞可誘導小鼠產(chǎn)生顯著的抗攻擊感染免疫