煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1(nmnat1)對mes23.5帕金森病細胞模型的保護作用

1、煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1 ( N M N A T l ) 對M E S 2 3 ．5 帕金森病細胞模型的保護作用目的：探討煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1 ( 卜瓜刪A T l ) 基因表達對帕金森病( P D ) 細胞模型M E S 2 3 ．5 細胞軸突長度及半胱氨酸蛋白酶3 ( C a s p a s e 3 ) 、超氧化物歧化酶I ( S O D l ) 表達的影響。方法：應(yīng)用細胞轉(zhuǎn)染、免疫熒光及W e s t e r n 印跡

2、分析等方法，在制作P D 細胞模型前向1 2 孔板內(nèi)分別轉(zhuǎn)染N M N A T l 高表達空載質(zhì)粒、N M N A T l 高表達質(zhì)粒、N M N A T l 干擾空載質(zhì)粒及N M N A T l 干擾質(zhì)粒，并檢測N M N A T l 高表達正常組、高表達陽性組、高表達陰性組、N M N A T l 干擾正常組、干擾陽性組和干擾陰性組以上6 組M E S 2 3 ．5 細胞軸突長度變化及C a s p a s e 3 蛋白、S O D

3、 l 蛋白的半定量表達。結(jié)果：與N M N A T I 高表達( 干擾) 正常組比較，N M N A T l 高表達( 干擾) 陰性組細胞軸突長度顯著縮短，且其C a s p a s e 3 表達量明顯增加，S O D l 表達量減少，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義；與N M N A T l 高表達( 干擾) 陰性組比較，N M N A T l 高表達陽性組細胞軸突長度明顯延長，且C a s p a s e 3 表達量顯著下降，S O D l 表達

4、量增加，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義，N M N A T l 干擾陽性組軸突長度變短，C a s p a s e 3 表達量上升，S O D l 表達量下降，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：細胞凋亡及氧化應(yīng)激在P D 軸突損傷過程中發(fā)揮重要作用，而N M N A T l能夠有效抑制凋亡蛋白C a s p a s e 3 表達、增加S O D l 表達，并明顯延緩軸索損傷，從而在一定程度上具有神經(jīng)保護作用。碩士研究生：李春燕( 神經(jīng)病學(xué))指導(dǎo)教師 ：謝安

5、木教授關(guān)鍵詞：煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1 ；基因高表達；帕金森病；軸突損傷目 錄弓l 言??????????????????????????????????????????????????”l第一章煙酰胺單核苷酸腺苷酰轉(zhuǎn)移酶1 ( N M N A T l ) 對M E S 2 3 ．5 帕金森病細胞模型的保護作用?????????????????????????????????????????????????????·21

6、實驗材料????????????????????????????????????????????????·21 ．1 M E S 2 3 ．5 細胞????????????????????????????????????????????”21 ．2 轉(zhuǎn)染質(zhì)粒????????????????????????????????????·21 ．3 實驗試劑??????????????????????????????????

7、??21 ．4 實驗儀器???????????????????????????????????????????????·32 實驗方法?????????????????????????????????????32 ．1 M E S 2 3 ．5 細胞培養(yǎng)????????????????????????????????32 ．2 質(zhì)粒D N A 的轉(zhuǎn)化及小量提取???????????????????????????32 ．3 細

8、胞轉(zhuǎn)染????????????????????????????????????52 ．4 免疫印跡實驗?????????????????????????????????”62 ．5 免疫熒光檢測和I 虱像分析????????????????????????????·92 ．6 統(tǒng)計學(xué)分析??????????????????????????????????”9第二章實驗結(jié)果????????????????????????????

9、??????92 ．1 不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染M E S 2 3 ．5 細胞后N M N A T l 蛋白水平的變化??????????????”92 ．2 不同表達水平N M N A T l 對帕金森病細胞模型M E S 2 3 ．5 軸索長度的影響????????·1 02 ．3N M N A T l 對M E S 2 3 ．5 細胞C a s p a s e 3 、S O D l 表達的影響???????????????l 1第三

10、章討論???????????????????????????????????·l 3結(jié) 論????????????????????????????????????????????????一1 5參考文獻????????????????????????????????????”l 6綜述??????????????????????????????????????????????????·1 8綜述的參考文獻??????

11、????????????????????????????2 3附 錄?????????????????????????????????????????????一3 0攻讀學(xué)位期問發(fā)表的論文、參加的會議和參與的課題情況???????????????·3 1致 謝???????????????????????????????????????????????3 2學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明??????????????????????????