熱休克對人肺a549細(xì)胞株中p2139;waf基因啟動子活性影響的初探

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文熱休克對人肺A549細(xì)胞株中p21基因啟動子活性影響的初探姓名：陶華申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：沈珝琲2003.6.1中囝西和醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文中文摘要將細(xì)胞置于短暫的升溫( > 3 7 ℃) 條件下，細(xì)胞會對溫度的升高產(chǎn)生一系列的主動調(diào)節(jié)過程，叫做熱休克應(yīng)答( h e a t s h o c k r e s p o n s e ) 。在一些細(xì)胞中( 如人肺上皮癌細(xì)胞株

2、A 5 4 9 ) ，熱休克應(yīng)答能夠?qū)е录?xì)胞周期的阻滯。細(xì)胞周期阻滯使得細(xì)胞可以停下來修復(fù)損傷并繼續(xù)細(xì)胞分裂，而導(dǎo)致這種現(xiàn)象發(fā)生的原因據(jù)認(rèn)為與依賴細(xì)胞周期素激酶( c y c l i n —d e p e n d e n t k i n a s e s ，C D K ) 的活性降低有直接的關(guān)系。p 2 1 蛋白f 也被稱作W A F l ，C A P 2 0 ，C i p l 以及S d i l ，R e 盤) 是一種C D K 的抑制

3、蛋白，它是C i p ／K i p 家族中的基本成員，具有保守序列的氨基端，用以抑制C D K 的活性。對應(yīng)激狀態(tài)下人體細(xì)胞周期阻滯現(xiàn)象的研究，有助于我們更好的掌握調(diào)控細(xì)胞增殖分化的機(jī)制，從而為治療癌癥找到新的突破口。而其中對熱休克狀態(tài)下p 2 1 基因啟動子激活水平的研究，能夠從基因調(diào)控的角度為這種細(xì)胞周期阻滯的機(jī)制提供線索。p 2 1 基因激活的程度在轉(zhuǎn)錄水平是由其啟動子的活性決定的。p 2 1 基因啟動子活性的增強(qiáng)將導(dǎo)致p 2 1

4、 基因的高表達(dá)，從而抑制C D K 的活性。p 2 1 基因啟動子的上游調(diào)控序列受多種轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，它們能結(jié)合在不同的調(diào)控序列位點(diǎn)上，在轉(zhuǎn)錄水平對p 2 1 的表達(dá)產(chǎn)生影響。其中p 5 3 對p 2 1 的調(diào)控作用受到了廣泛的關(guān)注，因?yàn)樗侨梭w中一種重要的抑癌基因。此外，許多其它的轉(zhuǎn)錄因子( 如S p l ，S p 3 ，h p 2 ，S T A T s ，C ／E B Pa ，C ／E B P B ，以及M y o D ) 可以通過

5、不依賴p 5 3 的機(jī)制激活p 2 l 基因。研究p 2 1 基因啟動子上游調(diào)控序列中不同片段在熱休克中的作用，可以初步確定p 2 l 基因受熱休克調(diào)控的元件的位置，從而縮小我們研究的范圍。循此思路我做了如下工作：一) 構(gòu)建了p 2 1 基因不同長度啟動子驅(qū)動的p M R E P 4 ／C A T 報(bào)告基因質(zhì)粒：p 2 1 ／C A T ( 含有p 2 1 基因啟動子上游調(diào)控序列- 2 2 9 1 b p + 3 5 b p ) ；p