真核表達質(zhì)粒載體pcdna3.1介導(dǎo)的人組織型激肽釋放酶基因?qū)钦T導(dǎo)大鼠高血壓和胰島素抵抗的治療作用及其機制研究

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文真核表達質(zhì)粒載體pcDNA3.1介導(dǎo)的人組織型激肽釋放酶基因?qū)钦T導(dǎo)大鼠高血壓和胰島素抵抗的治療作用及其機制研究姓名：趙春霞申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（心血管）指導(dǎo)教師：汪道文20040401華中科 技 大 學(xué) 同濟醫(yī)學(xué)院博 卜 學(xué)位論文 中 文摘 t( p c D N A - H K ) 。 大鼠 血壓心率測定儀測量血壓，每周一次，果糖誘導(dǎo)第2 周及基因治療后第 2 和 3周分別留取大鼠尾靜脈血及 2

2、4 小時尿標(biāo)本，采用臨床標(biāo)準(zhǔn)方法測定血脂、血胰島素、血糖和尿鎂離子濃度。3 D 3滲透壓儀測定尿滲透壓( A d v a n c e d I n s t r u m e n t s . I n c ) .胰島素抵抗指數(shù)( I R ) 按內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)模型技術(shù)( H O M A ) 計算:H O M A - I R = [ 空腹血漿胰島素( p U h n l ) x 空腹血糖( m m o l / L ) ] / 2 2 . 5( H

3、O MA - I R = F I N S x F B G / 2 2 . 5 ) 0 2 周時每組處死動物 2 只，\ V e s t e r n雜交分析重要器官中H K蛋白質(zhì)的表達及 E L I S A法檢測大鼠尿、血標(biāo)本中H K和E T - ] 的含量:R T - P C R法檢測各組大鼠基因治療前后主動脈 E T - 1 . E 丁 A - R，血管緊張素1 1受體 一 1 ( A T R - I ) 及腎 臟緩激膚受體2

4、 ( B K R - 2 )的表達情況。結(jié)果:高果糖飲水2周后，動物血壓、血胰島素水平、尿量和尿鎂離子含量均明 顯高于正常飲水組， 尿滲透壓顯著低于正常組。 一次靜脈 注射 p c D N A - H K后第 3 天即可明 顯降 低果糖誘導(dǎo)高血壓大鼠的 血壓 ( 由 1 3 5 . 1 士0 . 4 2 降至 1 3 0 . 5士 。 . 4 6 m m H g ) > 最大降壓效 應(yīng)在導(dǎo)入基因后第 1 4 天( 1 2 1 .

5、 2 土 。 . 5 5 m m H g ) ， 其降壓效應(yīng)持續(xù) 3 周以上。 并且在血壓下降的同時， 血胰島素濃度、 尿鎂離子量亦明顯降低。尿滲透壓則明顯升高。H K基因?qū)牒蟮?2 周，H K治療組動物主要臟器 H K蛋白質(zhì)的表達量明顯高于空載體對照組，并可在尿中檢測到 H K蛋白質(zhì)。而治療組大鼠血管 E T 1 . E T A - R及 A T R - 1 的mR N A表達則明顯低于對照組， 與正常組接近。 治療組大鼠尿中

6、E T I 的含量亦明顯低于對照組， 但血中E T - 1 的濃度兩組之間無顯著性差異。另外還發(fā)現(xiàn)治療組大鼠腎臟 B K R - 2表達亦明顯高于對照組 。結(jié)論: 動物高果糖飲水可導(dǎo)致高血壓及高胰島素血癥，其機理可能與血管E T 1 . E T A - R和A T R - 1 表達增加及尿鎂離子排出 增多 有關(guān)， H K基因的導(dǎo)入可能通過降低血管E T 1 , E T A - R和A T R - 1 的 表達及減少尿鎂離子的丟失