腫瘤表面抗原p18539;cerbb2單克隆抗體的基因工程抗體研究

1、中國科學技術大學博士學位論文腫瘤表面抗原p185單克隆抗體的基因工程抗體研究姓名：程聯(lián)勝申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：劉兢;王玉珍2002.10.1搦∞，乙糯摘 要苯芟蓯本實驗室已構建的三種臨床上具有良好應用潛力的坑鹽／瘤表面抗原P 1 8 5 的單克隆抗體出發(fā)，對它們的可變區(qū)的基因序列進 ／n ，———一——_ 。_ ?一——～行了克隆和序列分析，并通過分子生物學的方法將兩種單抗的輕鏈和 ———————————

2、～ 一—，—’—‘—’————一重鏈基因連接在一起構建了單鏈抗體( s c F v ) ，隨后在大腸桿菌中進行了表達。其中一種表達產物純化后，完成了對此重組單鏈抗體的E L I S A 、w e s t e r n b l o t 、免疫組化和F A C S 等免疫學活性的鑒定。在單鏈抗體的基礎上，初步摸索了多價抗體和噬菌體庫構建的條件。廠 ( 在確定單鏈抗體保留了原有親代抗體的抗原結合特性后，通過分 ＼～∑’子生物學手段將其與人抗體I

3、 g G l 的恒定區(qū)F c 片段連接，構建了s c F v ．F c 融合分子。該融合分子在C H O ．G S 系統(tǒng)中得到了高效的表達，表達量在1 0 ．2 0 0 微克／m l 之間。對融和分子進行親和純化后，通過E L I S A 、競爭性抑制、w e s t e r nb l o t 、免疫組化、F A C S 等手段鑒定了它的抗原結合特性，證明它是一個雙價同二聚體分子且與親代抗體有著完全相同的抗原結合位點。隨后對融合分子又進