虎紋捕鳥蛛毒素?突變體真核表達(dá)及鑒定

1、湖南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文虎紋捕鳥蛛毒素Ⅺ突變體真核表達(dá)及鑒定姓名：王凡申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：劉中華20100601白酶抑制活性大小。實(shí)驗(yàn)求出重組H W T X 一Ⅺ及四個(gè)突變體抑制胰蛋白酶的K i 值都處于同一個(gè)數(shù)量級，氨基酸突變并沒有影響到胰蛋白酶抑制活性，這與預(yù)期一致。通過膜片鉗技術(shù)分析了重組H W T X 一Ⅺ及其突變體對于大鼠背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞( D R G ) 電壓門控鉀離子通道的抑制活性：四個(gè)突變

2、體的鉀通道抑制活性明顯減弱，其I C ∞超過1 0 0 p M ，而重組H W T X —X I 的I C 。。約為3 ．9 uM ，表明氨基酸突變實(shí)現(xiàn)了減弱鉀離子通道抑制活性的效果。進(jìn)一步通過小鼠腦室注射的方法檢測重組H W T X 一Ⅺ及其突變體神經(jīng)毒性：重組H w T X 一Ⅺ的神經(jīng)毒性較大，半致死劑量為2 4 7 ．3 ug ／k g 體重，而突變體，特別是H w T X 一Ⅺ一m u t l ，在劑量達(dá)到2 5m g ／k g

3、 體重仍未見明顯的神經(jīng)毒性。本論文對釀酒酵母表達(dá)重組H W T X 一Ⅺ的條件進(jìn)行了摸索，以期提高其表達(dá)量。首先根據(jù)偏愛密碼子優(yōu)化H W T X 一Ⅺ基因，其次對于培養(yǎng)的溫度和培養(yǎng)基p H 也進(jìn)行了摸索。結(jié)果表明，上述條件的改變對于重組H W T X 一Ⅺ的表達(dá)量并無明顯影響。 對于載體p e t 。。a 和宿主菌B L 2 1 ( D E 3 ) p l y s S 原核表達(dá)系統(tǒng)也進(jìn)行了嘗試，其表達(dá)產(chǎn)率明顯低于真核表達(dá)系統(tǒng)，表明這一表