維生素E琥珀酸酯磷脂前藥的設(shè)計(jì)、合成及其抗腫瘤活性研究.pdf

1、維生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate，VES)是維生素E家族中抗腫瘤活性最高的化合物，具有選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的特性。然而，VES水溶性差且生物利用度低，難以應(yīng)用于臨床治療中。為了提高VES的水溶性，開發(fā)新型的納米藥物遞送系統(tǒng)，本文分別將維生素E琥珀酸酯(VES)與甘油磷脂酰膽堿(GPC)、溶血磷脂酰膽堿(LPC)偶聯(lián)，制備出兩種新型的雙親性前藥，在水中自組裝成納米脂質(zhì)體，并對其合成路線、理化性質(zhì)及體外抗腫瘤活性進(jìn)

2、行了研究，主要內(nèi)容如下:
　　(1)維生素E琥珀酸酯(VES)和甘油磷酰膽堿(GPC)通過酯鍵連接，得到維生素E琥珀酸酯-甘油磷酰膽堿偶聯(lián)物(Di-VES-GPC)。通過高效液相色譜(HPLC)、電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)、核磁共振氫譜(1H-NMR)和碳譜(13C-NMR)進(jìn)行Di-VES-GPC偶聯(lián)物化學(xué)結(jié)構(gòu)的表征。利用熒光探針法、動(dòng)態(tài)光散射(DLS)、透射電鏡(TEM)和冷凍透射電鏡(cyro-TEM)對Di-VES-GPC

3、的自組裝行為進(jìn)行研究。結(jié)果表明，Di-VES-GPC在水相中自組裝成均勻分散的納米脂質(zhì)體，其脂質(zhì)體的平均直徑為183nm，Zeta電位為-18.6mV。同時(shí)，該脂質(zhì)體具有典型多室脂質(zhì)體的精細(xì)結(jié)構(gòu)，雙分子層厚度為5nm。體外藥物釋放結(jié)果顯示，Di-VES-GPC脂質(zhì)體在弱酸性環(huán)境下(pH5.0)緩慢釋放出自由藥物VES。此外，采用共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)與電噴霧質(zhì)譜儀(ESI-MS)進(jìn)一步研究脂質(zhì)體在細(xì)胞內(nèi)攝取及藥物釋放行為。結(jié)果

4、顯示，該脂質(zhì)體可以被MCF-7細(xì)胞有效攝取并能夠降解轉(zhuǎn)化為自由藥物VES。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)(MTT)和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Di-VES-GPC脂質(zhì)體能通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制癌細(xì)胞的增殖，但它的抗腫瘤活性低于原藥VES。
　　(2)維生素E琥珀酸酯(VES)和溶血磷脂酰膽堿(LPC)通過含有二硫鍵的連接臂連接，得到維生素E琥珀酸酯-溶血磷脂酰膽堿偶聯(lián)物(VES-SS-LPC)，在腫瘤細(xì)胞還原性條件下可以快速釋放自由藥物VES，具有還原

5、敏感性。通過高效液相色譜(HPLC)、電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)、核磁共振氫譜(1H-NMR)和碳譜(13C-NMR)進(jìn)行VES-SS-LPC偶聯(lián)物化學(xué)結(jié)構(gòu)的表征。利用電導(dǎo)率法、動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和透射電鏡(TEM)對VES-SS-LPC的自組裝行為進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，VES-SS-LPC在水相中自組裝成均勻分散的納米脂質(zhì)體，其脂質(zhì)體的平均直徑175nm，Zeta電位為-21.6mV。體外藥物釋放結(jié)果表明，VES-SS-LPC脂質(zhì)體在

6、谷胱甘肽存(GSH)作用下能夠快速釋放出游離藥物VES。這是因?yàn)樵谶€原性條件(GSH)下二硫鍵斷裂，導(dǎo)致脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)被破壞，從而釋放出自由藥物VES。因此，可以推斷在癌細(xì)胞內(nèi)還原性條件下，VES-SS-LPC脂質(zhì)體能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的快速釋放。此外，采用共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)和電噴霧質(zhì)譜儀(ESI-MS)進(jìn)一步研究脂質(zhì)體在細(xì)胞內(nèi)攝取及藥物釋放行為。結(jié)果顯示，該脂質(zhì)體可以被MCF-7細(xì)胞有效攝取并能夠降解轉(zhuǎn)化為自由藥物VES。最重要的是

7、，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)(MTT)結(jié)果表明，VES-SS-LPC脂質(zhì)體表現(xiàn)出與原藥VES相當(dāng)?shù)捏w外抗腫瘤活性。
　　綜上，本文分別將疏水性維生素E琥珀酸酯(VES)與親水性磷脂通過含有酯鍵和二硫鍵的連接臂連接，得到兩種雙親性VES-磷脂前藥。兩親性磷脂前藥在水相中自組裝成納米脂質(zhì)體，具有良好的穩(wěn)定性，在弱酸性條件下可以釋放出原藥VES。相比于利用酯鍵連接的Di-VES-GPC偶聯(lián)物，還原敏感性VES-SS-LPC偶聯(lián)物所形成的響應(yīng)型脂質(zhì)體能