氮氧自由基對(duì)鐵過(guò)載引起的A549細(xì)胞過(guò)氧化的保護(hù)作用.pdf

1、近幾年，隨著環(huán)境污染的日益嚴(yán)重，霧霾天氣備受人們關(guān)注。鐵作為空氣污染中的主要致癌物之一，可通過(guò)Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基(OH)，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激進(jìn)而引發(fā)DNA損傷和細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致呼吸系統(tǒng)疾病及癌癥的發(fā)生。我們除了要加強(qiáng)環(huán)境的治理外，更需要找到一種有效的防護(hù)治療方法。目前，臨床上用于防護(hù)作用的藥物與人們所期盼的還存在很大的差距，所以研發(fā)新型的防護(hù)藥己然成為科研人員迫切解決的課題。
　　氮氧自由基是一類(lèi)含有自旋單電子的穩(wěn)定化合物，

2、具有強(qiáng)大的清除體內(nèi)有害自由基的能力。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，很少劑量的氮氧自由基就可以發(fā)揮有效的抗氧化作用。希望通過(guò)本論文有關(guān)NITR類(lèi)氮氧自由基對(duì)A549細(xì)胞的保護(hù)性能研究，推進(jìn)其成為預(yù)防和治療肺部疾病的新型抗氧化應(yīng)激藥物的可行性。
　　本文合成了2，4-二甲氧基苯取代的氮氧自由基(NITR-2，4-(OMe)2，簡(jiǎn)稱(chēng)NITR)，利用紅外光譜(IR)、紫外可見(jiàn)光譜(UV-vis)、X-射線(xiàn)粉末衍射(XRD)、元素分析等方法對(duì)其進(jìn)行了表征。

3、
　　為了探討氮氧自由基的抗氧化能力，實(shí)驗(yàn)選用鐵過(guò)載致A549細(xì)胞氧化損傷為模型，研究NITR氮氧自由基對(duì)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。將培養(yǎng)的細(xì)胞分為四組:①正常對(duì)照組:用不含血清的基本培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，與加藥組作對(duì)照;②檸檬酸鐵銨(FAC)組:選用含有100μM的FAC培養(yǎng)基培養(yǎng)A549細(xì)胞，使其由于鐵過(guò)載造成細(xì)胞氧化損傷;③NITR組:選用含有0.25μM的NITR培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，研究NITR加入培養(yǎng)基后是否增強(qiáng)細(xì)胞活力;④FAC+

4、 NITR組:A549細(xì)胞中加入一定量的含有0.25μM的NITR和100μM的FAC培養(yǎng)基培養(yǎng)，研究NITR加入培養(yǎng)基后，是否可以減緩FAC對(duì)細(xì)胞的損傷達(dá)到保護(hù)的作用。實(shí)驗(yàn)過(guò)程都是分組培養(yǎng)作用24 h后，收集并檢測(cè)細(xì)胞。采用MTT、DIPA染色、熒光顯微鏡觀(guān)察、流式細(xì)胞技術(shù)及Western Blot等技術(shù)，檢測(cè)了細(xì)胞活力、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞內(nèi)氧化還原水平、細(xì)胞周期分布、細(xì)胞凋亡率及凋亡蛋白的變化。研究結(jié)果顯示:
　　1.NITR氮氧

5、自由基可以增強(qiáng)細(xì)胞的活力，減輕FAC對(duì)A549細(xì)胞的損傷，減少凋亡數(shù)目。
　　2.加入NITR氮氧自由基后，細(xì)胞內(nèi)氧化還原水平指標(biāo)SOD增強(qiáng)，MDA含量下降，GSH含量明顯上升，表明氮氧自由基能夠有效地減少FAC對(duì)A549細(xì)胞的氧化損傷，增強(qiáng)A549細(xì)胞的抗氧化能力。
　　3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549細(xì)胞周期和凋亡發(fā)現(xiàn)氮氧自由基能有效緩解檸檬酸鐵銨對(duì)A549細(xì)胞產(chǎn)生的G2期阻滯現(xiàn)象，減少細(xì)胞的凋亡。
　　4.Wester