l-arg對(duì)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化調(diào)控機(jī)制的探討

1、錦 州 壓虧 院 學(xué)搪2 o 0 4A p r，2 5 ( 2 ) JJ i n z h o uM e dC o l l e g e? ’I ． '7L—Ar g對(duì) 兔 骨髓基 質(zhì)細(xì)胞 分化調(diào) 控機(jī) 制的探討 張斌， 王 稚 英 2( 1 ． 錦州 醫(yī)學(xué)院附屬第 一醫(yī)院 口腔科 ；2 ． 錦 州醫(yī)學(xué)院附屬 口腔 醫(yī)院，遼寧 錦州 1 2 1 0 0 1 )【 摘要】目的 通過(guò)體外兔骨髓細(xì)胞培養(yǎng) ，探討 L— A r g 對(duì) B

2、MS C分化作用機(jī)制。方法 將兔 B MS C懸液進(jìn)行體 外培養(yǎng) ，進(jìn)行形 態(tài)學(xué)觀察和組 織學(xué)檢 測(cè) ；檢測(cè) L — A r g 前 體物質(zhì) 左旋精 氨酸 ( L —A r g i n i n )及 B MS C細(xì)胞 中環(huán) 鳥(niǎo)苷 酸 ( c G MP )含量 。結(jié)果 L — A r g i n i n 可顯著增加 B MS C的 c G M P的含量 ，各 組間差異亦顯 著 ( P <0 ． 0 1 ) 。結(jié) 論 L — A r

3、g 的作 用機(jī)制 部分是通 過(guò)鳥(niǎo)環(huán) 苷酸途徑進(jìn)行 信號(hào)傳導(dǎo)實(shí) 現(xiàn)的。【 關(guān)鍵詞】一氧化氮 ；基質(zhì)細(xì)胞 ；分化 【 中圖 分類(lèi)號(hào)】R 3 2 9 ． 2【 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【 文章編號(hào)11 0 0 0 — 5 1 6 1 ( 2 0 0 4 ) 0 2 — 0 0 0 7 — 0 3Re g u l a t i v eMe c h a n i s m o fD o n o ro fNi t r i cOx i d e ( L—A r g

4、)o nDi f f e r e n t i a t i o no fRa b b i tBo n eM a r r o w S t r o maCe l l sZ HA N G Bi n ， W ANG Z h i —y i n g( T h eF i r s tA f f i l i a t e dH o s p i t a l ， J i n z h o uMe d i c a lC o l l e g e ，J i n z

5、 h o u1 2 1 0 0 1C h i n a )【 A b s t r a c t 】O b j e c t i v eT oi n v e s t i g a t et h ee f f e c t so fd o n e ro fn i t r i co x i d e( L—A r g )o nt h ed i f f e r e n t i a t i o na n dt h em e c h a n i s mo fb

6、 o n em a r r o ws t r o m ac e l l s ( B MS C ) i nr a b b i tm o d e 1 ．Me t h o d sRa b b i tB MS Cswe r ei s o l a t e da n dc u l t u r e di nv i t r o． W ee x a mi n e dt h ep r o d u c to fc GM Pi nr e sp o n s et

7、 oL — ARG．Re s u l t sL—Ar gh a de f f e c t so nc GM Pp r o d u c t i o nd u r i n gt h e6d a y so ft h ee x p e r i me n t s ．Ast h e ∞ n c e n t r a t i o no ft h eL — Ar gi n c r e a s e d t h ec GMP p r o d u c t i

8、 o no fB M S C e n h a n c e d ． Th ed i f f e r e n c eb e t we e ng r o u p si ss i g n i f i c a n tP < 0． 01 ．C o n c l u s i o n sL — Ar gmi g h tf o r m c e l l sb ya c t i v a t i n gs ol u b l eg u a n g l a

9、 t ec y c [ a s e s ，wi t hr e su l t a n ti n c r e a s ei nt h er a t e s o fi n t r a c e l l u l a rp r o d u c t i o no fc GM ．【 K e yw o r d s 】n i t i co x i d e ； s t r o m a lc e l l ； d i f f e r e n t i a t i

10、 o n骨髓成骨作用來(lái)源于 B MS C ，作為理想 的骨種 子細(xì)胞，B MS C具有多向分化潛能。骨髓成骨是一 個(gè)非常復(fù)雜 的過(guò)程 ，受多種激素及 因子的調(diào)節(jié)。據(jù) 此．本研究應(yīng)用 3個(gè) 月兔 B MS C的細(xì)胞 培養(yǎng)方 法 探討 L—A r g前體物質(zhì)對(duì) B MS C細(xì)胞分化 的影 響 ，并探討這種調(diào)控作用的機(jī)制 ，為利用細(xì)胞因子促進(jìn) 骨損傷的修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。1 材料 和方 法 1 ． 1 取材 出生 3個(gè)月齡 日本大耳 白兔

11、 ，戊 巴比妥耳緣靜脈注射 ，雙側(cè)股部剪毛 ，碘酒 ，酒精消毒 后 ，用 注射器抽 吸雙側(cè)股骨骨髓 3 m l ，混入無(wú)血清 的 DM 培養(yǎng)基反復(fù)抽 吸吹打 ，離心。1 ． 2 方 法 1 ． 2 ． 1 細(xì)胞培養(yǎng) 將上述細(xì)胞懸液經(jīng) 4號(hào)針頭反 復(fù)抽吸成單 細(xì)胞懸 液。加入 3 ． 5 m l 含 1 0 ％小牛血 清的培養(yǎng)基、地塞米松 0 ． 4 r n g ／ L 、維生素 C5 0 m g ／ L 、8 一磷酸甘油鈉 l O m

12、mo l ／ L ，以 3 ×1 0 。 單個(gè)細(xì)胞／ m l的細(xì)胞數(shù)接種入培養(yǎng)瓶 中，在 3 7 ℃ ，5 ％C 0 2 及飽 合濕度條件下 培養(yǎng) ，5 d后半量換 液 ，以后 2 ～3 d半量換液一次 。待 細(xì)胞融合成單 層后 ，用 0 ． 2 5 ％胰蛋白酶消化 ，進(jìn)行傳代培養(yǎng) ，常規(guī) 2 ～3 d 半量換 液 。1 ． 2 ． 2 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法 實(shí)驗(yàn)分組 ：實(shí)驗(yàn)共 分 6 組 。將傳至第三代的細(xì) 【 作者簡(jiǎn)介]張斌

13、 ( 1 9 7 1 一)男 ，遼 寧省錦州市人 ，主治 醫(yī)師 ，醫(yī)學(xué)碩士 ，主要研究方 向?yàn)楣墙M 織工程 。維普資訊 http://www.cqvip.com 張斌 ， 等 ． L — A r g 對(duì) 兔骨髓基質(zhì) 細(xì)胞 分化調(diào)控 機(jī)制的探討 9從 表 2可 見(jiàn) ，L—Ar g可 顯 著 增 加 B MS C 的 c G MP的含量 ，濃度越高作 用越 顯著 ，至第 6 d時(shí) 與對(duì)照組相 比可增強(qiáng) 3 ～4倍 ， 與對(duì)照組相 比， 各

14、組 均有非常顯著性差異( P<0 ． 0 1 ) 。各組 間差異亦顯 著 ， ( P<0 ． 0 1o第 2 d Ⅱ 組與 I 組 比較， P<0 ． 0 5 。3 討 論 B MS C形成 、增殖 、分化受多因素的影響 ，其 中細(xì)胞 因子影響起重要作用 。而細(xì)胞 因子對(duì) B MS C的作用 ，可分為兩個(gè) 階段 ，一 是對(duì) B MS C形成 和增殖 的作 用，另 一是 對(duì) B MS C成 骨 活力 的作用。對(duì)成骨細(xì)胞

15、而言，堿性磷酸酶是成骨細(xì)胞標(biāo)志性酶 之一 J ，是成骨 細(xì)胞分 泌 的～種 水解酶 ，與成 骨 細(xì)胞的初萌骨化活動(dòng)密切相關(guān) 。L —A r g 是較小的生物 活性 分子，具有多種生 物功能的特點(diǎn)在于它是 自由基 ，極易參與傳遞電子 反應(yīng) ，加入機(jī)體 的氧化還原過(guò)程 中。L—A r g通過(guò) 與 血 紅 素 結(jié) 合 在 靶 細(xì) 胞 內(nèi) 激 活 鳥(niǎo) 苷 酸 環(huán) 化 酶 ( G C ) ，通過(guò) c G MP作為第二信使 ，產(chǎn)生生物效應(yīng)；或者通過(guò)

16、提高細(xì)胞質(zhì) A D P一核糖轉(zhuǎn)移酶 ( A D P R T)的活性影響蛋 白質(zhì) 的功能，參與 中樞興奮性突觸的 興奮性傳遞。L—A r g的細(xì)胞 內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑較復(fù) 雜 ，除經(jīng)典 的環(huán) 鳥(niǎo)苷 酸 ( c G MP )途徑 ，L—A r g還可能通過(guò) 多種非 c G MP依 賴(lài)性途徑 影響基 因轉(zhuǎn) 錄，信使核糖核酸 ( m R N A )翻譯 和蛋 白質(zhì) 翻譯后 加工 。最 近 ，A t s u s h iK o y a ma L 2J

17、等 發(fā)現(xiàn) ，L—A r g能激活環(huán)氧合酶 ，而導(dǎo)致骨髓基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)前列腺素 E 2( P G E 2 )的增加 ，通過(guò) P G E 2 調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化。在 L—A r g誘 導(dǎo)體外 培養(yǎng) B MS C過(guò)程 中測(cè) 定 c G MP含量，結(jié)果 c G MP含量明顯高于對(duì)照組 ，并 且隨著 L —A r g 濃度 的增加 ，c G MP含量增加越明 顯。這一結(jié)果證實(shí)了 L —A r g 對(duì) B MS C的促分化作 用與 L —A r g 使細(xì)胞

18、內(nèi) c G MP含量升高有關(guān) ，其生 物效應(yīng)至少 部分是 由 c G MP介導(dǎo)的。其 生物傳 導(dǎo)途徑可能為 L— A r g激活血紅蛋 白可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán) 化酶 ( S G C) ，使 三 磷 酸 鳥(niǎo) 苷 ( G T P )轉(zhuǎn) 變 成 ( c G) ，再依次通過(guò)特異性調(diào)節(jié)蛋 白質(zhì)磷 性化 調(diào) 節(jié)離子通道的傳導(dǎo)性 、磷脂酶活性等導(dǎo)致細(xì)胞 出現(xiàn) 特定的生物效應(yīng)。c G MP之后的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途 徑較復(fù)雜 ，在不同的細(xì)胞類(lèi)型有所不同，環(huán)鳥(niǎo)苷酸

19、 靶蛋白尚待于研究。( 參 考 文 獻(xiàn)][ 1 ]C o l l i g n o nH，D a v i c c oM J ，B a r l e tj P ．I s o l a t i o no fc e l l sf r o mo v i n ef e t a ll o n gb o n ea n dc h a r a c t e r i z a t i o no ft h e i r~t e o b l a s t i ca c t

20、i v i t i e sd u r i n gi nv i t r om i n e r a l i z a t i o n 【 J ] ．A r c hP h y s i o lB i o e h ~ n ， 1 9 9 7 ，1 0 5 ( 2 ) ：1 5 8 —1 6 9 ．[ 2 ]A t s u s h iK， E r iO t s u k a ． N i t r i co x i d ea c c e l e r a t

21、 e st h ea s c o r b i ca c i d— i n d u c e do s t e o b l a s t i cd i f f e r e n a t i o no fmo u s es 廿 帆 a 1r 2c e l l sb ys t i mu l a t i n gt h ep r o d u c t i o no fp r o s t a g l a n d i n[ J ] J． ＆ ． E j p，

22、2 O 0 o。 2 2 ： 3 9 1 ．( 收稿日期]2 0 0 4 — 0 3 — 0 3上頜左側(cè) 6 、7 牙體融合 9 例報(bào)告 牙體融合在一起 的較為少見(jiàn) ，9例病 例報(bào) 告如下。1 臨床資料 李晶H( 錦州市古塔區(qū)醫(yī)院 口腔科 ，遼 寧錦州 1 2 1 0 0 0 )現(xiàn)將我院近2 年的2討 論 9 個(gè)病例 中 ，男性 6 例 ，女性 3 例 ，年齡 組在 2 7 ～3 5歲 ， 共 同特點(diǎn) 為 開(kāi)始 沒(méi) 有 不適 感 ，隨

23、 年齡 增 長(zhǎng)牙 體增 大 ，開(kāi)始感覺(jué) 口內(nèi)不舒服 ，因腭側(cè) 牙齦常發(fā)炎 ，方來(lái)我院就診 。檢查 ：頰舌向牙冠并 列 為一體 ，腭側(cè) 牙齦壓 迫萎縮 Ⅱ度 ，牙 齦緣 充 血 、水 腫 ，測(cè) 牙 周 袋 約 2 ． 5 m m，未 見(jiàn)齲 壞 ，牙齒 無(wú) 松 動(dòng) ，牙石 ( +) ，叩 診 ( 一) ，牙 齦 正 常 ，牙無(wú) 松動(dòng) ，未見(jiàn)齲壞 。融合牙常 由兩 個(gè)正 常牙 胚融合 而成 。在牙 發(fā)育期 ，可 以是完全融合 的，也可 以是不

24、 完全融 合 的。引起 融 合 的原 因 ，一般認(rèn)為是壓 力所致 。如果這種 壓 力發(fā)生 在兩個(gè) 牙齒 鈣化 之前 ，則牙冠部 融合 ；如果這種 壓 力發(fā)生 在牙冠 發(fā) 育 完成之后 ，則形成根 融合 為一 ，而 冠分 為二 的牙。牙 本質(zhì) 總是相通連 的。無(wú)論是 乳牙 或恒牙 均可 發(fā)生 融合牙 ，最 常見(jiàn)于下頜乳 切牙。此外 ，正常 牙與額 外牙有 時(shí)也 可發(fā) 生融 合。( 收稿日期]2 0 0 3 — 0 9 —1 1【 作者簡(jiǎn)介