hla抗體分析的流式細(xì)胞技術(shù)

1、廣 州 醫(yī) 藥 2 0 0 4年第 3 5 卷第 5 期 H L A抗體分析 的流式細(xì)胞技術(shù) 易燕 肖露露 廣州器 官移植配型 中心 ( 廣州 5 1 0 0 9 5 )2 l 世紀(jì)被稱為 “ 器官移植 的時代” ，器官移植已經(jīng)成 為重要組織臟器功能衰竭的根治措施，但排斥反應(yīng)的發(fā)生 嚴(yán)重影響了移植物功能和存活率，因此預(yù)防和減少排斥反 應(yīng)一直是器官移植 領(lǐng)域 中的研究熱點(diǎn)。2 0 0 3年 ，T e r a s a k i教授在 “ 器官

2、移植體液免疫學(xué)說”中闡明，移植排斥是由體液免疫介導(dǎo)的 ， 抗一 H L A抗體可立即或緩慢地殺死移植物 而引起超急性、加速、急性和慢性排斥反應(yīng)，H L A抗體分 析方法是移植前預(yù)測排斥反應(yīng)和移植后預(yù)示移植物喪失的 重要免疫學(xué)依據(jù)?。H L A抗體檢測方法的研究經(jīng)歷了近 4 | D年歷程，期間召開了 l 3 屆 H L A國際專題討論會 ( i n t e r n a ·t i o n a lw o r k s h o p )不

3、斷創(chuàng)新和推進(jìn)試驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展 ， 2 O 世紀(jì) 7 O年代血清學(xué)技術(shù)被應(yīng)用于 H L A抗體分析 ， 9 o年代酶聯(lián) 免疫 吸 附 試 驗(yàn) ( e n z y m e — l i n k e di m m u n o a d s o r b e n ta s s a y ，E L I S A )技術(shù)迅速發(fā)展，并實(shí)現(xiàn)了對淋巴細(xì)胞抗原的提純 ，使得 H L A抗體分析的 E L I S A方法被推薦。流式細(xì)胞儀是一種先進(jìn)的多參數(shù)分析儀器，利用

4、標(biāo)記 熒光素的抗體在通過激光束時各個角度的光散射區(qū)分分子 的大小和抗原特異性 ，可定性或定量分析細(xì)胞表面或細(xì)胞 漿中的抗原或與之結(jié)合的生物活性分子。1 9 7 2 年第一臺商 品化的 F A C S ． I 型流式細(xì)胞儀 問世后，研究者就注意到流 式細(xì)胞儀高靈敏度的特點(diǎn)并開始探索其在 H L A抗體分析中的應(yīng)用。9 o年代末流式細(xì)胞分析技術(shù)已應(yīng)用于供受者交叉 配型 ( c r o s s m a t c h )和群體反應(yīng)性抗體 ( p

5、a n e lr e a c t i v ea n t i ．b o d y ， P R A ) 分析 。1交叉配型 交叉配型試驗(yàn)用于分析器官移植 受者可接受 的供者 H L A基因，移植前交叉配型陽性被視為器官移植的絕對禁 忌證 。1 9 6 4年 P a u lT e r a s a k i 教授發(fā)明的補(bǔ)體依賴微量淋 巴細(xì) 胞毒 ( C o m p l e m e n t — d e p e n d e n tc y t o t o

6、 x i c i t y ，C D C )技 術(shù)，經(jīng) 美國國立衛(wèi)生研究院 ( N a t i o n a lI n s t i t u t e so fH e a l t h ，N I H)認(rèn)可并命名為 N I H ． C D C， 至今仍是腎移植前組織配型的 重要技術(shù)標(biāo) 準(zhǔn)之一 。N I H — C D C所需 時 間約 2小時 ，有實(shí) 驗(yàn) 條件的限制，例如新鮮尸體器官移植時器官冷缺血時間限 制，淋巴細(xì)胞的活性 ，I g M類抗體的影

7、響等；特別是要求 技術(shù)人員操作熟練、具有豐富的H L A相關(guān)知識和綜合分析 試驗(yàn)結(jié)果的經(jīng)驗(yàn)。1 9 7 3年 T h o m a sC ．F u l l e r 將抗人免疫球 蛋白 ( a n t i — h u m a n i m m u n o g l o b u l i n ， A H G)介質(zhì)引入 了 C D C反 應(yīng) 體 系 ( A n t i · h u m a n g l o b u l i n ·

8、 a u g m e n t e dc o m p l e m e n t · d e ·’ 廣州市科研基金資助項 目 ( 項 目編號： 9 7 - Z - 4 8 · 1 0 4 )· 醫(yī)學(xué)前沿 ·p en d e ~c y t o t o x i c i t y ， A H G — C D C ) ，提高 了 H L A抗體識別 的 靈敏度 J ，但是 ， A H G — C D

9、C實(shí)驗(yàn)中孵育和洗滌的步驟延長 了反應(yīng)時間。有的 H L A實(shí)驗(yàn)室因標(biāo)化 A H G有困難或者為 了避免復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)操作 ， 采取延長 N I H — C D C的孵育時間或 提高孵育溫度的方法 ， 也可增加實(shí)驗(yàn)的靈敏度。1 9 8 3 年 G a r o v o y 首次提出了流式細(xì)胞交叉配型 ( F l o wc y t o m e t r yc r o s s m a t c h ， F C X M)技術(shù)，以 F I T C標(biāo)記的抗一

10、 I g G抗體檢測供者特異性 H L A抗體結(jié)合于供者淋巴細(xì)胞上的情 況 J 。 8 O 年代至9 o 年代中期許多歐美的 H L A實(shí)驗(yàn)室開展 了對 F C X M 的研究。1 9 8 8年 L a z d a等對 3 8例 尸 腎移 植 F C X M 的 回顧性分 析 ，發(fā) 現(xiàn) F C X M 陽性 患者 中有 3 5 ％ 未發(fā) 生急性排斥反應(yīng) ，F(xiàn) C X M 陽性組和陰性組 的移植效果無統(tǒng) 計學(xué)差異；他們認(rèn)為這些 F C

11、X M陽性是非特異性的，F(xiàn) C X M檢出的 I s g類抗體中包括了抗一 H L A抗體和非 H L A抗體 。1 9 9 6 年 M a a r t e n 等對 11 4 例接受 C D C陰性供體 的腎移植受 者進(jìn)行 回顧性 F C X M研究 ，發(fā)現(xiàn) F C X M陽性受者的急性排 斥發(fā)生率為 5 3 ％ ( 8 ／ 1 5 ) ，這些受者的 1 年移植物存活率 為 8 0 ％；F C X M陰性受者的急性排斥發(fā)生率為 4 l

12、 ％ ( 4 1 ／9 9 ) ，他們 的 1年 移植 物存 活 率 為 8 7 ％，兩 組 間 P>0 ． 0 5。1 9 9 7 年 S h e n t o n 等對多個移植中心的 F C X M進(jìn)行 綜合分析后 ，發(fā)現(xiàn) F C X M 方 法學(xué) 的差 異可能 是一 些 實(shí)驗(yàn) 室 的 F C X M結(jié)果與臨床移植效果缺乏相關(guān)性 的原 因?。因此，F(xiàn) C X M技術(shù)在臨床的應(yīng)用一直受到質(zhì)疑。9 o 年代末期，隨著流式細(xì)胞儀多光束

13、多參數(shù)分析技術(shù) 的改進(jìn)、單克隆抗體的研發(fā)和分析軟件的升級，使 F C X M技術(shù)得到極大改善。1 9 9 8 年 B r y a n 等對 1 1 6 9例腎移植受者 的7 年移植物存活率進(jìn)行 了研究，他們將患者分為三組 ：I 組為接受 F C X M陰性供體的再次移植受者 1 0 6例；I I 組 為接受 A H G — C D C陰性供體的再次移植受者 1 7 4例；Ⅲ組為 接受 A H G ． C D C陰性供體的首次移植受者 8

14、 8 9例；三組的7年移植物存活率分別為 6 8 ％、4 5 ％和 7 2 ％，統(tǒng)計學(xué)分析顯 示 I 組與Ⅲ組間無顯著性差異，而 I 組和Ⅲ組均與 Ⅱ組有 顯著性差異；他們 的結(jié) 論是 ，與用 A H G ． C D C方法相 比，F(xiàn) C X M可改善再次尸 腎移植的遠(yuǎn)期效果，使再次移植受者 的遠(yuǎn)期移植物存活率達(dá)到初次移植受者的水平 J 。2 0 0 1 年 K a r p i n s k i 等對接受 A H G ． C D C陰性

15、供體的 1 4 3例腎移植受 者進(jìn)行了回顧性 F C X M，其中 F C X M陽性 的 l 8例 ( 1 3 ％)受者在移植后早期喪失了移植物 J 。2 0 0 2年 S l a v c e v 等的 研究表明 F C X M陽性初次腎移植受者的移植后 1 年內(nèi)排斥 維普資訊 http://www.cqvip.com 廣 州 醫(yī) 藥 2 0 0 4 年第 3 5 卷第 5 期 2 0 0 0，8 ( 1 )： 3 - 1 5 ．5

16、L a z d aVA ，P o l l akR，Mo z e sMF，e ta LT h er e l a t i o n s h i pb e -t we e nf l o wc y t o me t e rc r e s s ma t c hr e s u l t sa n ds u b e s q u e n tr e-j e c t i o ne p i s o d e si nc a d a v e rr e n a la

17、l l o g r a f tr e c i p i e n t s ．T r a m-p l a n t a t i o n ， 1 9 8 8 ， 4 5 ( 3 )： 5 6 2 - 5 6 5 ．6Ma a r t e nHL，R i a n n e0，An n e ma r i e lH ，e ta 1． Noa d v a n t a g eo ff l o wc y t o me t r yc r o s s ma t c

18、 ho v e rc o mp l e me n t - - d e p e n d e n tc y - -t o t o x i c i t yi ni mmu n o l o g i c a ll yw e l l - d o c u me n t e dr e n a la ll o g r a f tr e c i p i e n t s ． T r a n s p l a nt a t i o n ， 1 9 9 6 ， 6

19、 2 ( 9 )： 1 3 4 1 - 1 3 4 7 ．7S h e n t o nBK，B e l lA E， Ha r me rAW ，e ta 1． I mp o r t a n c eo fm e t h o d o l o g yi nt hef l o wc y t o m e t r i cc r o s s ma t c h ： am u h i c en t es t u d y ．T r a n s p l a n

20、 tP r o c ，1 9 9 7，2 9： 1 4 5 4 · 1 4 5 5 ．8Br y a n C F，Ba i e rKA， Ne l s o nP W ， e ta 1． L o n g - t e r m s u r v i v a l i si mp r o v e di nc a d a v e f i cr en a l r et r a n s p l a n t at i o nb yf l

21、o wc y t o me t r i cc r e s s ma t c h i n ~ T r a n s p l a n t at i o n， 1 9 9 8， 6 6( 1 2 )： 1 8 2 7 ． 1 8 3 2 ．9K a r p i n s k iM，R u s hD，J e f e r y J ，e ta 1． F l o wc y t o m e t r i cc r o s s ma t c h i n gi

22、 np r i ma r yr en a lt r a n s p l a n tr e c i p i e n t s w i t han e g a t i v ea n t i - h u ma ng l o b u i ne n h a n c e dc y t o t o x i c i t yc r o s s m a t c h ．JA mS o c N e p h r o l ， 2 0 0 1 ，1 2 ( 1 2

23、 ) ： 2 8 0 7 ·2 8 1 4 ．1 0S l a v c e vA，L a c h aJ ， Ho n s o v aE， e ta 1．C l i n i c a lr el e v a nc eo fa n t ib o d i e st oHLAa n t i g e n st md e t e c t a b l eb yt hes t a n d a r dc o mp l e me n t - d e

24、 p e n d e n tc y t o t o x i c i t yt e s LT r a n s p lI n t ，2 0 0 1 ，1 6 ( 1 2 )： 8 7 2 - 8 7 8 ．不育癥 內(nèi)科治療現(xiàn)狀 古子平 廣州市南江總醫(yī)院泌尿外科 ( 5 1 0 1 3 0 )世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計全球性不育癥發(fā)病率為 8 ％? ，我 國估計為 1 0 ％，不育癥雖不危及生命 ，但可影響男子身心 健康，導(dǎo)致家庭不睦，故在計劃生育的同

25、時 ，不育癥的治 療，仍具積極意義。1一般治療 1 ． 1 糾正不良生活習(xí)慣：例如吸煙、吸毒、酗酒、穿緊身 褲、熱水盆浴等，避免影響生育的藥物 、化學(xué)物質(zhì)或放射 線 。1 ． 2 性生活指導(dǎo)：主要是指導(dǎo)測定排卵期性交?。排卵期 的預(yù)測：①月經(jīng)史 ： 9 5 ％月經(jīng)期規(guī)則伴有經(jīng)前期癥狀及痛 經(jīng)的婦女有排卵，排卵時間在月經(jīng)中期。②基礎(chǔ)體溫：一 般在月經(jīng)中期體溫最低 日或體溫升高的前一 日為排 卵期。③宮頸粘液：常為排卵的重要依據(jù)。宮頸粘液量

26、多，雞蛋 · 3 ·1 1T a m b u rA R， B r a yR A， T a k e m o t oS K， e ta LF lo wc ~ o me t ·r i cd e t e c t i o no fHLA · s p e c i f i ca n t i b o d i e sa sap r ed i c t o ro fh e a r ta l l o g r a f tr

27、 e j e c t i o n ．T r a n s p l a nt a t i o n ， 2 0 0 0 ， 7 0 ( 7 ) ：1 O 5 ． 1 0 5 9 ．1 2 肖露露，張 升，葉 欣，等 ． P R A在腎臟移植 中的 應(yīng)用 ．中華泌尿外科雜志，1 9 9 7 ，1 8( 6 )： 3 3 7 - 3 4 0．1 3 肖露露 ，張 升，葉 欣，等 ．高敏腎移植受者的二 硫基蘇糖醇． 群體反應(yīng)性抗體測定及其意義 ．中

28、華腎臟 病 雜志 ，1 9 9 7 ，1 3 ( 5 )： 2 6 9 - 2 7 2 ．1 4 肖露露，馬琳雅 ，葉 欣，等 ．腎移植術(shù)后受者高 P R A介導(dǎo)超急性排斥反應(yīng) ． 第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1 9 9 8 ，1 8 ( 4 ) ： 2 9 0 - 2 9 1 ．1 5W a h r ma n nM ，E x n e rM ，R e g e l eH ，e ta 1． F l o w c y t o me t r yb a s

29、 e dd e t e c t i o no fHLAa ll o a n t i b o d yme d i a t e dc l a s s i c a l c o mp l e m e n ta c t i v a t i o n ． JI m m u n o lMe t ho ds ，2 0 0 3 ， 2 7 5( 2 ) ： 1 4 9 - 1 6 0 ．1 6Wo r t h i n g t o nJ E，R o b s

30、o nA J ，S h e l d o nS ， e ta 1．Ac om p ~ r i ·s o no fe n z y me · l i n k e di mmu n o a b s o r b e n ta s s a y sa n df l o w c y -t o me t r yt e c h n i q u e s o ft hed e t e c t i o no fHL As p e c i

31、 f ica n t i b o d -i e s ．H u mI m m u n o l ， 2 0 0 1 ， 6 2 ( 1 0 ) ：1 1 7 8 · 1 1 8 4 ．1 7Mu r oM ，S a n c h e z ． Bu e n oF， Ma t i nL，e ta 1． R e l a t i o n s h i pb et w e e nC D Cc r o s s · m a t c hi

32、nl i v e r r e c i p i e n t sa n da nt i b o d ys c r e e n i n gb yf l o w c y t o me t r y ． T r a n s p l a n tP r o c，2 0 0 3， 3 5( 5 )： 1 8 9 4 - 1 8 9 5 ．( 收稿 日 期 ： 2 0 0 4— 0 6— 1 1 )· 綜 述 ·清樣 ，宮頸粘液拉絲長

33、度超過 8c m，粘液干片見粗長羊齒 植物樣結(jié)晶，提示即將排卵。④尿黃體生成素 ( L H)峰值 自我監(jiān)測 ： 用酶聯(lián)免疫反應(yīng)試劑盒可快速測定尿 L H峰值 ( 其濃度 > 4 0U ／ L ) ，尿 L H峰值后 2 4小時排卵。⑤B超監(jiān) 測：卵泡直徑 ≥1 7 ～ 1 8n l l n ，子宮內(nèi)膜厚度達(dá) 1 0n l l n以上，提示 2 4小時內(nèi)排卵。⑥對月經(jīng)周期不規(guī)則或排卵障礙者，應(yīng)行促排 卵。常用方法 ： ①克羅米芬 (

34、 c ． c )有報道是三 個 5 天 ，即月經(jīng)第 5天開始服藥 ，每天服藥 1 次 ，每次 5 O ～ 1 0 0m g ，連服 5天 ，服 藥 后 隔 天性 交 1 次共 5次 ( 5天) 。此法缺點(diǎn)是 C ． C有抗雌激素作用，影響子宮內(nèi)膜發(fā) 育，故常服 藥后加雌激素 ( E 2 )例如：炔雌醇 0 ． 0 0 5～0 ． O lm s ／ 次，1 次／ d或補(bǔ)佳樂 4m s ／ 次，1次／ d或倍美力 0 ． 6 2 5m s