大洋性金槍魚(yú)和三文魚(yú)的分子鑒定技術(shù)研究.pdf

1、大洋性金槍魚(yú)和三文魚(yú)具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，近年來(lái)國(guó)際、國(guó)內(nèi)該類(lèi)產(chǎn)品的消費(fèi)也逐漸上升。除了優(yōu)質(zhì)金槍魚(yú)和三文魚(yú)種類(lèi)外，與金槍魚(yú)屬于同一科的鮪、扁舵鰹、東方狐鰹等種類(lèi)，與三文魚(yú)的親緣關(guān)系比較近的狗魚(yú)、鰳魚(yú)等種類(lèi)，也都常用于生產(chǎn)金槍魚(yú)或三文魚(yú)罐頭和魚(yú)酥等產(chǎn)品。但是，不同原魚(yú)料所生產(chǎn)的魚(yú)類(lèi)產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和過(guò)敏物質(zhì)含量有很大不同，價(jià)格千差萬(wàn)別，因其引發(fā)的魚(yú)類(lèi)產(chǎn)品安全性問(wèn)題也成為關(guān)注的焦點(diǎn)。雖然很多國(guó)家都有相應(yīng)標(biāo)簽明確的法規(guī)，但是摻假造假的判定標(biāo)準(zhǔn)和標(biāo)

2、簽制度的有效實(shí)施，都必須建立在準(zhǔn)確、快速的魚(yú)類(lèi)種類(lèi)鑒定的基礎(chǔ)上。為杜絕某些商販以劣質(zhì)充當(dāng)優(yōu)質(zhì)種類(lèi)的欺詐非法行為，保障消費(fèi)者的購(gòu)物知情權(quán)益，迫切需要靈敏和可靠的檢測(cè)方法和體系來(lái)鑒定金槍魚(yú)和三文魚(yú)食品的物種來(lái)源。
　　本文以金槍魚(yú)和三文魚(yú)兩類(lèi)樣品為研究對(duì)象，陰性對(duì)照分別為與金槍魚(yú)或三文魚(yú)親緣關(guān)系相近的魚(yú)類(lèi)，采用傳統(tǒng)定性PCR技術(shù)和雙重?zé)晒舛縋CR技術(shù)對(duì)樣品種類(lèi)進(jìn)行檢測(cè)。在雙重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)體系中選擇的特征基因是線粒體16S rD

3、NA以及CR基因。本研究還通過(guò)環(huán)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）對(duì)三文魚(yú)的CR基因進(jìn)行了擴(kuò)增，首次探究LAMP技術(shù)在魚(yú)類(lèi)物種鑒定方面的應(yīng)用。
　　首先，在金槍魚(yú)雙重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)體系中，將16S rDNA作為金槍魚(yú)屬鑒定的屬特征基因，CR作為5種主要經(jīng)濟(jì)金槍魚(yú)類(lèi)（藍(lán)鰭金槍魚(yú)、大目金槍魚(yú)、長(zhǎng)鰭金槍魚(yú)、黃鰭金槍魚(yú)和鰹）鑒定的種特征基因。金槍魚(yú)屬以及5種主要經(jīng)濟(jì)金槍魚(yú)類(lèi)作為檢測(cè)對(duì)象，親緣關(guān)系較近的青干金槍魚(yú)、扁舵鰹、圓舵鰹、東方狐鰹、鮪以及

4、條紋四鰭旗魚(yú)作為陰性對(duì)照樣品。結(jié)果顯示，金槍魚(yú)的屬特征基因以及5種主要經(jīng)濟(jì)金槍魚(yú)類(lèi)的種特征基因均能在該雙重體系中成功檢測(cè)出，并通過(guò)傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增、克隆測(cè)序進(jìn)一步驗(yàn)證了所建立體系的檢測(cè)準(zhǔn)確性和可行性。其次，本研究將雙重?zé)晒舛縋CR技術(shù)運(yùn)用到中國(guó)市場(chǎng)上三文魚(yú)種類(lèi)檢測(cè)領(lǐng)域。經(jīng)過(guò)搜索已報(bào)道的三文魚(yú)基因信息，通過(guò)比對(duì)分析，選擇16S rDNA作為鮭科魚(yú)類(lèi)的科特征基因，CR作為4種主要經(jīng)濟(jì)三文魚(yú)類(lèi)（大西洋鮭、虹鱒、狗鮭和紅鮭）的種特征基因，設(shè)計(jì)出

5、特異性的熒光定量PCR引物和探針，建立雙重?zé)晒舛縋CR的三文魚(yú)檢測(cè)體系。該體系中鮭科以及4種主要經(jīng)濟(jì)三文魚(yú)類(lèi)作為檢測(cè)對(duì)象，與鮭科親緣關(guān)系較近的狗魚(yú)科以及鰳魚(yú)科作為陰性對(duì)照組。鮭科的科特征基因以及4種主要經(jīng)濟(jì)三文魚(yú)類(lèi)的種特征基因均能在該雙重體系中成功檢出。并通過(guò)傳統(tǒng)PCR測(cè)序，證實(shí)了體系檢測(cè)結(jié)果的可信性。雙重?zé)晒舛縋CR體系可以一次檢測(cè)出兩種特征基因，提升了檢測(cè)的便捷性，為我國(guó)金槍魚(yú)、三文魚(yú)市場(chǎng)中摻假產(chǎn)品種類(lèi)的快速檢測(cè)提供了技術(shù)支持。

6、
　　最后，首次將環(huán)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)運(yùn)用到三文魚(yú)種類(lèi)檢測(cè)方面，對(duì)主要經(jīng)濟(jì)三文魚(yú)類(lèi)的CR基因進(jìn)行LAMP引物設(shè)計(jì)，建立大西洋鮭環(huán)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)體系。在該體系中選擇大西洋鮭作為檢測(cè)對(duì)象，與其親緣相近的虹鱒、狗鮭和紅鮭作為陰性對(duì)照組。大西洋鮭的種特征基因可以通過(guò)擴(kuò)增檢測(cè)出來(lái)，并且傳統(tǒng)PCR以及熒光定量PCR的結(jié)果也驗(yàn)證了環(huán)等溫?cái)U(kuò)增大西洋鮭檢測(cè)結(jié)果的可信性。雖然該技術(shù)操作簡(jiǎn)便，快速，但是重復(fù)性較差，假陽(yáng)性較高等因素限制了該技術(shù)的發(fā)展，其檢測(cè)體系