大洋性金槍魚和三文魚的分子鑒定技術(shù)研究.pdf

1、大洋性金槍魚和三文魚具有較高的營養(yǎng)價值，近年來國際、國內(nèi)該類產(chǎn)品的消費(fèi)也逐漸上升。除了優(yōu)質(zhì)金槍魚和三文魚種類外，與金槍魚屬于同一科的鮪、扁舵鰹、東方狐鰹等種類，與三文魚的親緣關(guān)系比較近的狗魚、鰳魚等種類，也都常用于生產(chǎn)金槍魚或三文魚罐頭和魚酥等產(chǎn)品。但是，不同原魚料所生產(chǎn)的魚類產(chǎn)品的營養(yǎng)價值和過敏物質(zhì)含量有很大不同，價格千差萬別，因其引發(fā)的魚類產(chǎn)品安全性問題也成為關(guān)注的焦點(diǎn)。雖然很多國家都有相應(yīng)標(biāo)簽明確的法規(guī)，但是摻假造假的判定標(biāo)準(zhǔn)和標(biāo)

2、簽制度的有效實(shí)施，都必須建立在準(zhǔn)確、快速的魚類種類鑒定的基礎(chǔ)上。為杜絕某些商販以劣質(zhì)充當(dāng)優(yōu)質(zhì)種類的欺詐非法行為，保障消費(fèi)者的購物知情權(quán)益，迫切需要靈敏和可靠的檢測方法和體系來鑒定金槍魚和三文魚食品的物種來源。
　　本文以金槍魚和三文魚兩類樣品為研究對象，陰性對照分別為與金槍魚或三文魚親緣關(guān)系相近的魚類，采用傳統(tǒng)定性PCR技術(shù)和雙重?zé)晒舛縋CR技術(shù)對樣品種類進(jìn)行檢測。在雙重?zé)晒舛縋CR檢測體系中選擇的特征基因是線粒體16S rD

3、NA以及CR基因。本研究還通過環(huán)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）對三文魚的CR基因進(jìn)行了擴(kuò)增，首次探究LAMP技術(shù)在魚類物種鑒定方面的應(yīng)用。
　　首先，在金槍魚雙重?zé)晒舛縋CR檢測體系中，將16S rDNA作為金槍魚屬鑒定的屬特征基因，CR作為5種主要經(jīng)濟(jì)金槍魚類（藍(lán)鰭金槍魚、大目金槍魚、長鰭金槍魚、黃鰭金槍魚和鰹）鑒定的種特征基因。金槍魚屬以及5種主要經(jīng)濟(jì)金槍魚類作為檢測對象，親緣關(guān)系較近的青干金槍魚、扁舵鰹、圓舵鰹、東方狐鰹、鮪以及

4、條紋四鰭旗魚作為陰性對照樣品。結(jié)果顯示，金槍魚的屬特征基因以及5種主要經(jīng)濟(jì)金槍魚類的種特征基因均能在該雙重體系中成功檢測出，并通過傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增、克隆測序進(jìn)一步驗(yàn)證了所建立體系的檢測準(zhǔn)確性和可行性。其次，本研究將雙重?zé)晒舛縋CR技術(shù)運(yùn)用到中國市場上三文魚種類檢測領(lǐng)域。經(jīng)過搜索已報(bào)道的三文魚基因信息，通過比對分析，選擇16S rDNA作為鮭科魚類的科特征基因，CR作為4種主要經(jīng)濟(jì)三文魚類（大西洋鮭、虹鱒、狗鮭和紅鮭）的種特征基因，設(shè)計(jì)出

5、特異性的熒光定量PCR引物和探針，建立雙重?zé)晒舛縋CR的三文魚檢測體系。該體系中鮭科以及4種主要經(jīng)濟(jì)三文魚類作為檢測對象，與鮭科親緣關(guān)系較近的狗魚科以及鰳魚科作為陰性對照組。鮭科的科特征基因以及4種主要經(jīng)濟(jì)三文魚類的種特征基因均能在該雙重體系中成功檢出。并通過傳統(tǒng)PCR測序，證實(shí)了體系檢測結(jié)果的可信性。雙重?zé)晒舛縋CR體系可以一次檢測出兩種特征基因，提升了檢測的便捷性，為我國金槍魚、三文魚市場中摻假產(chǎn)品種類的快速檢測提供了技術(shù)支持。

6、
　　最后，首次將環(huán)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)運(yùn)用到三文魚種類檢測方面，對主要經(jīng)濟(jì)三文魚類的CR基因進(jìn)行LAMP引物設(shè)計(jì)，建立大西洋鮭環(huán)等溫?cái)U(kuò)增檢測體系。在該體系中選擇大西洋鮭作為檢測對象，與其親緣相近的虹鱒、狗鮭和紅鮭作為陰性對照組。大西洋鮭的種特征基因可以通過擴(kuò)增檢測出來，并且傳統(tǒng)PCR以及熒光定量PCR的結(jié)果也驗(yàn)證了環(huán)等溫?cái)U(kuò)增大西洋鮭檢測結(jié)果的可信性。雖然該技術(shù)操作簡便，快速，但是重復(fù)性較差，假陽性較高等因素限制了該技術(shù)的發(fā)展，其檢測體系