酒醅發(fā)酵液降解河豚毒素的初步研究.pdf

1、河豚毒素(TTX)是一種神經性毒素，劇毒，它是一種阻斷劑，妨礙Na+的傳導，一般情況下是“兩性離子”的存在形式。其毒性比氰化鉀還要強1000多倍。由于河豚肉新鮮美味，食用它的人很多，沿海地區(qū)和日本需求量較大。因此每年因食用河豚魚而導致中毒乃至死亡的事件特別多。但是隨著對其研究的逐漸深入以及海洋藥物不斷被開發(fā)和利用，TTX在醫(yī)學領域的作用漸漸變廣泛，而且在神經學領域以及生物學研究等方面也有應用。TTX不僅存在于河豚魚魚體中，還存在于許多其

2、他動物體中（脊椎或是無脊椎動物）。至于TTX的起源問題長時間以來存在著爭議，現(xiàn)在微生物起源假說更為人們所接受。依據(jù)微生物在毒素降解方面的作用，特別是對和TTX具有相似結構的物質如石房蛤毒素的降解作用，本實驗主要為了研究酒醅中所含微生物對TTX降解的可能性，并探討酒醅降解TTX的原因。
　　以山西杏花春汾酒有限公司提供的酒醅為降解材料，利用免疫層析檢測法對酒醅降解后的河豚毒素進行檢測。
　　為優(yōu)化酒醅對河豚毒素的降解條件，本實

3、驗以酒廠釀酒發(fā)酵了24天的酒醅為降解材料，用免疫層析檢測法來考察酒醅添加量、降解溫度、降解時間、搖床轉速等因素對TTX降解效果的影響，最后在最優(yōu)因素條件下，用小鼠生物法評價酒醅對TTX的降解效果。實驗結果表明：當酒醅添加量為16g，溫度為30℃，搖床轉速為50r/min的條件下，酒醅降解TTX的能力最強；在上述最優(yōu)條件下，隨著TTX降解時間的增加，昆明鼠的死亡時間被不斷地延長，在第五天之后便保持不變。
　　實驗中用酒醅降解河豚卵巢

4、，結果卵巢的毒性有下降。進一步證實了在現(xiàn)實生活中用酒醅來降解河豚魚廢棄器官防止環(huán)境二次污染的可能性。對酒醅微生物進行分離培養(yǎng)之后到了革蘭氏陽性芽孢菌（細菌類），兩種主要霉菌和酵母菌。同時對酒醅發(fā)酵過程中的含水量和酸度進行了測試，發(fā)現(xiàn)含水量不斷在增加，最后才下降，而酸度則剛開始稍微下降后又不斷上升。由于含水量和酸度的變化與酒醅中微生物數(shù)量的變化有很大的關系，酒醅中含水量的增加和酸度的先下降后上升，都是酒醅中微生物數(shù)量增多的緣故。用酒醅中分

5、離培養(yǎng)得到的四種微生物來降解河豚毒素，沒有看到毒性的變化，用四種微生物（根霉，曲霉，青霉，乳酸菌）來降解河豚毒素也沒有看到效果。一個原因可解釋為單株菌對河豚毒素沒降解能力，第二個原因可能是是這些菌都不是降解河豚毒素的優(yōu)勢菌株。第三個原因可能是微生物不是降解河豚毒素的原因，真正有降解作用的是酒醅發(fā)酵過程中產生的活性酶等物質。
　　為了區(qū)別生物轉化作用和物理吸附作用。以PBS溶液為陰性對照，對重復洗了三次的酒醅離心后的剩余固體中所含河

6、豚毒素進行試紙條檢測，測磁信號值。結果發(fā)現(xiàn)兩者的T線和C線的磁信號值相差不大，也就是說在酒醅降解離心后的固體中幾乎檢測不到河豚毒素的存在。因為微生物吸附作用是個可逆的過程，用溶液洗滌后，被吸附的毒素可重新溶解到溶液中。本實驗在離心固體的洗滌液中檢測不到河豚毒素，這就可以排除是微生物吸附結合河豚毒素的原因，所以酒醅降解河豚毒素是一個生物轉化的作用，可能是微生物轉化的作用，也有可能是酒醅發(fā)酵過程中產生的活性物質的降解作用。
　　從酒醅

7、，酒醅上清液，破碎酒醅上清液對河豚毒素的降解結果來看。他們的降解能力沒有很大區(qū)別。酒醅與酒醅上清液的降解結果一樣表示酒醅能夠降解河豚毒素不是細菌的作用，可能是酒醅發(fā)酵過程中產生的一種活性物質具有降解作用，酒醅上清液與破碎酒醅上清液的降解結果一樣則說明能夠降解河豚毒素的物質是產生于胞外，而非胞內。用競爭性ELISA方法比較酒醅上清和破碎酒醅上清的降解作用，結果顯示兩者的降解效果之間沒顯著差異性，這進一步說明了降解河豚毒素的物質產生于胞外，