生物法降解黃曲霉毒素B1的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、黃曲霉毒素(Aflatoxin,簡稱AFT)是一類由真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物,具有很強的毒性和致癌性。黃曲霉毒素理化性質(zhì)非常穩(wěn)定,在食品加工過程中難以被破壞。與傳統(tǒng)的物理和化學方法相比,生物法降解黃曲霉毒素具有反應條件溫和、不造成產(chǎn)品的營養(yǎng)流失及不會有新的毒素產(chǎn)生等優(yōu)點,因此越來越受到人們的重視。目前已經(jīng)報道多種微生物對黃曲霉毒素具有較強的降解作用。
  本研究從容易被黃曲霉毒素污染的環(huán)境中篩選具有降解黃曲霉毒素B1(AFB1)能力

2、的細菌菌株。以香豆素為唯一碳源從動物糞便、發(fā)酵食品、花生土壤及實驗室保存的菌株中篩選出12株能高效降解AFB1的微生物菌株。經(jīng)16s rDNA測序分析鑒定,12株菌均為芽孢桿菌屬。用高效液相色譜法(HPLC)測定AFB1含量,從而計算得到AFB1降解率。37℃培養(yǎng)72h后,有9株菌的發(fā)酵液對AFB1降解率達80%以上,7株菌發(fā)酵上清液對AFB1降解率達60%以上。一株來源于發(fā)酵食品納豆的菌株發(fā)酵上清液對AFB1的降解率達85.73%,將

3、上清液濃縮后制成的粗酶液對AFB1降解率達到91.4%,該菌株經(jīng)形態(tài)學、生理生化及系統(tǒng)發(fā)育學方法鑒定為枯草芽孢桿菌,命名為Bacillus subtilis Natto3。
  以Bacillus subtilis Natto3為對象,進一步研究了發(fā)酵時間、反應溫度、pH值以及金屬離子等對AFB1降解率的影響。當培養(yǎng)時間為72h,反應溫度為37℃,pH值為8.5時,Natto3粗酶液對AFB1的降解率最高,而且Zn2+,Mn2+,

4、Mg2+,Cu2+和Li+五種金屬離子均會不同程度的抑制其降解活性。
  將在37℃條件下培養(yǎng)72h的Natto3菌液的不同成分對AFB1進行降解實驗研究,結果發(fā)現(xiàn)Natto3菌細胞懸浮液對AFB1的降解率為6.5%,細胞提取物對AFB1的降解率為僅為1.4%,而發(fā)酵上清液對AFB1降解率高達87%。對Natto3發(fā)酵上清液分別用1mg mL-1蛋白酶K、沸水浴10min及0.22μm濾膜抽濾三種方式處理,前兩種處理明顯降低發(fā)酵上

5、清液對AFB1的降解率,處理后降解率分別為8.6%和15%;而抽濾對上清液中AFB1的降解率影響不大(83%),推測Natto3降解AFB1可能是通過分泌胞外降解酶實現(xiàn)的。以受到黃曲霉毒素污染的花生樣品為對象,研究了Natto3粗酶液添加量、反應時間、pH值以及溫度對花生中AFB1降解效率的影響。當溫度為35℃,pH值為8,Natto3菌粗酶液添加量為3mL時,用粗酶液處理10天后,高度污染的花生樣品中AFB1的濃度從344μg kg-

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