酶切保護PCR分析檢測環(huán)境中二惡英類化合物的方法學研究.pdf

1、二惡英類化合物(DLCs)是包括二氯苯并二惡英(PCDDs)、二氯苯并呋喃(PCDFs)和多氯聯(lián)苯(PCBs)等一大類化合物的總稱,由于其在環(huán)境中分布廣泛,不易于生物及化學降解,毒性高以及生物富集和生物放大的特性,對人和動物造成嚴重的影響.化學抽提結合高效氣相色譜-質譜聯(lián)機檢測(HRGC/HRMS)被認為是鑒定和定量單個PCDD、PCB和PCDF異構體的"金標準"方法.該方法檢測費用昂貴,費時,故而發(fā)展了大量快速、經濟的檢測和估計DLC

2、s復合混合物的相對作用強度的篩選生物實驗.目前兩種方法已經被美國EPA推薦為指導方法:熒光報道基因生物法和免疫法.該研究建立了一種新DLCs檢測生物技術,稱為酶切保護PCR分析(EPM-PCR),比這兩種推薦生物方法更為靈敏和簡便,更適于廣泛推廣.EPM-PCR分析原理基于DLCs的作用機制,利用了一種介導DLCs效應的配體依賴因子——多環(huán)芳烴受體(AhR).DLCs通過在體外激活細胞溶質中的AhR,形成的配體:AhR復合物進入胞核與核

3、轉運蛋白Arnt結合成雜二聚體復合物,能識別相關基因(如CYPlAl)上游基因增強子部位一段特異DNA序列,即二惡英反應元件(DREs),增強靶基因的轉錄及其相關酶產物的生成.EPM-PCR分析通過定性與定量檢測DLCs活化AhR結合DNA的量來估算二惡英的作用劑量.已經證實二惡英誘導產生的結合DNA與其毒效應在一定范圍內呈比例,所以該方法可以評價樣本的綜合毒性當量(TEQs).創(chuàng)新之處:該項研究受到國家自然科學基金資助(No.2010