嗜酸乳桿菌對β-乳球蛋白過敏小鼠腸道菌群及其代謝的影響.pdf

1、牛乳β-乳球蛋白(β-lactoglobulin，β-Lg)過敏常引發(fā)消化系統(tǒng)變態(tài)反應或過敏性胃腸炎，破壞腸道微生態(tài)平衡，嚴重影響嬰幼兒的身心健康和成長成長。最新報道表明益生菌可通過調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)促進宿主代謝、營養(yǎng)、免疫賦活，但有關益生菌調(diào)節(jié)腸道環(huán)境與抑制過敏的關系和其機制方面研究甚少。故本課題以前期獲得的、可有效緩解β-Lg過敏的嗜酸乳桿菌為研究對象，PCR-DGGE法監(jiān)測對照組、致敏組和不同劑量嗜酸乳桿菌組小鼠結(jié)腸糞便菌群多樣性，

2、高效液相/氣相色譜和氨基酸自動分析儀測定各組小鼠腸道代謝物變化，ELISA法檢測各組小鼠血清總IgE的含量，并觀察嗜酸性粒細胞數(shù)量和過敏癥狀。通過分析益生菌調(diào)節(jié)腸道菌群變遷和代謝活動與宿主健康之間的關系，為揭示益生菌緩解過敏的作用機制提供新的理論依據(jù)。
　　1.動物模型的建立和驗證
　　雌性BALB/c小鼠隨機分為對照組、β-Lg過敏組和不同濃度嗜酸乳桿菌灌胃組(n=15)。嗜酸乳桿菌組小鼠自第1天起每周3次灌胃不同濃度的菌

3、懸液（低濃度10μg/g;中濃度50μg/g;高濃度250μg/g），對照組和致敏組灌服等量的生理鹽水，共3周。β-Lg致敏組和嗜酸乳桿菌組小鼠在第7、14、21天給予腹腔注射0.01 mL/g1mg/mL的過敏原(1mL弗氏佐劑+1mL2mg/mLβ-Lg)。對照組小鼠腹腔輔以等量生理鹽水。實驗的第23天，β-Lg口服激發(fā)(1mg/g)2次（間隔30min），評估過敏癥狀，眼球取血后進行脫臼致死，獲取結(jié)腸糞便。實驗結(jié)果顯示，與對照組小

4、鼠相比，β-Lg致敏組小鼠過敏癥狀顯著，且其血清總IgE含量和嗜酸性粒細胞數(shù)目顯著升高(P＜0.05)，提示動物模型建立成功。而嗜酸乳桿菌可有效緩解過敏癥狀和降低過敏小鼠血清中抗體水平，且呈量效依賴性。
　　2.嗜酸乳桿菌干預對牛乳過敏小鼠腸道菌群多樣性的影響
　　對PCR-DGGE的優(yōu)勢條帶進行測序分析，發(fā)現(xiàn)對照組的優(yōu)勢菌群為擬桿菌屬、未培養(yǎng)的擬桿菌門、厚壁菌門、類桿菌門。致敏組相比對照組，乳桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量顯著減少，

5、梭狀芽孢桿菌數(shù)量顯著增加;而嗜酸乳桿菌能顯著調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡（P＜0.05），且與灌服的劑量成正比。運用Quantity One軟件對PCR-DGGE圖譜進行分析，致敏組小鼠結(jié)腸菌群DGGE圖譜的豐富度為30±2，顯著低于對照組小鼠35.67±1.15（P＜0.05）。同時，過敏組小鼠結(jié)腸菌群的Shannon-Wiener指數(shù)和最大Shannon-Wiener指數(shù)均顯著低于對照組(P＜0.05)。嗜酸乳桿菌干預能夠顯著提高腸道菌群多樣

6、性個各項指標，中、高菌組和對照組無顯著差異（P＞0.05）。
　　3.嗜酸乳桿菌干預對牛乳過敏小鼠腸道代謝物的影響
　　應用高效液相/氣相色譜和氨基酸自動分析儀分析各組小鼠腸道代謝物的變化，實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，致敏組小鼠結(jié)腸糞便中乳酸含量顯著降低（P＜0.05）;短鏈脂肪酸中乙酸水平顯著上升，丙酸、丁酸、異丁酸、異戊酸水平顯著降低(P＜0.05）。而嗜酸乳桿菌干預能夠有效改善過敏腸道內(nèi)乳酸和短鏈脂肪酸的代謝。另外，主