飼用益生菌的篩選及其菌劑制備技術研究.pdf

1、羅伊氏乳桿菌作為一種重要的動物微生態(tài)制劑中的益生菌，其菌體本身及代謝產(chǎn)物能夠抑制仔豬腸道過路菌和病原菌的粘附及生長，因此能夠提高仔豬的免疫力和降低仔豬死亡率，從而大大的改善了養(yǎng)殖行業(yè)的質量。本課題是從畜禽糞便中有針對性、目的性地篩選出產(chǎn)酸菌株，且對其進行體外性能評價。主要研究如下：
　?。?）飼用益生菌的篩選。經(jīng)過初篩及耐酸耐膽鹽復篩，從仔豬糞便中篩選出三株產(chǎn)酸菌株，通過菌體特征、糖發(fā)酵等生理生化實驗以及分子生物學鑒定，最后確定其

2、為羅伊氏乳桿菌，且其中耐受性最強的為NCU801。
　　（2）NCU801生長曲線繪制。羅伊氏乳桿菌NCU801屬于異型發(fā)酵，能夠利用葡萄糖代謝產(chǎn)生乳酸、乙酸，同時還能夠產(chǎn)生乙醇、二氧化碳等，0-4h、4-16h、16-24h及24h后分別為延滯期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。
　?。?）NCU801的動物胃腸道耐受性能研究。L.reuteri NCU801在pH2.5動物胃液時，菌株D值大于60min；通過模擬動物腸液耐受性實

3、驗，菌體在腸液作用4h后，存活率仍有38.6％。在膽鹽濃度為0.3%的改良MRS培養(yǎng)基中作用24h后，活菌數(shù)下降一個多數(shù)量級，但活菌數(shù)仍有9.7×105CFU/mL?？梢姡琇.reuteri NCU801具有較強抵抗動物胃腸道逆環(huán)境的能力。
　?。?）NCU801的抑菌性能研究。通過對腸道中常見的9種致病菌的抑菌實驗，發(fā)現(xiàn)羅伊氏乳桿菌NCU801的菌體、發(fā)酵液和無菌上清液均具有抑菌性，且發(fā)酵液和發(fā)酵液的無菌上清液的抑菌效果較菌體更

4、強，其中發(fā)酵液和無菌上清液對大腸埃希氏菌抑制作用最強，抑菌圈直徑達18mm以上，由此可以判斷出羅伊氏乳桿菌NCU801的抑菌作用主要依賴于本身的代謝產(chǎn)物。
　?。?）NCU801腸道粘附性能研究。NCU801對Caco-2細胞的粘附，其粘附指數(shù)同菌體濃度、菌體發(fā)酵時間、孵化時間及pH值都有對應的關系；而NCU801對Caco-2細胞粘附指數(shù)最大值達（5.08±0.15）CFU/cell。NCU801活菌、死菌均能在置換、競爭和排斥

5、性的抑制病原菌對Caco-2細胞粘附；其中抑制粘附作用最大的為活菌懸液對大腸桿菌排斥粘附抑制，抑制粘附率達86.8±4.5（%）。
　?。?）NCU801高密度培養(yǎng)條件研究。通過單因素試驗，確定了L.reuteri NCU801最佳碳源、氮源、緩沖鹽、無機鹽離子分別為葡萄糖、牛肉膏和酵母膏、NaAc、Mg2+；而正交試驗優(yōu)化的培養(yǎng)基配方為：牛肉膏1.5%，酵母膏1.5%，葡萄糖5%，MgSO40.06%，MnSO40.01%，Na