外源線粒體抑制MPP+誘導的SH-SY5Y細胞損傷的研究.pdf

1、帕金森氏病是一種常見的中老年神經(jīng)退行性疾病，常引起運動障礙，如動作遲緩、靜止震顫以及姿勢異常等。病理表現(xiàn)為多巴胺能神經(jīng)元減少和路易小體的形成。目前常用的治療藥物有左旋多巴類制劑、B型單胺氧化酶（B-type monoamine oxidase, MAO-B）抑制劑、多巴胺受體激動劑以及神經(jīng)修復制劑等，但這些藥物僅能改善癥狀，并不能完全治愈。而大量研究顯示，線粒體功能障礙與帕金森氏病的發(fā)病有密切聯(lián)系。眾所周知，線粒體是真核細胞重要的細胞器

2、，參與多項細胞活動，而且具有自己獨特的遺傳物質(zhì)，當線粒體功能發(fā)生障礙時會導致許多的人類疾病。近年來有研究發(fā)現(xiàn)將功能正常的線粒體轉(zhuǎn)運至線粒體功能受損的受體細胞后，可以修復受體細胞的線粒體功能，恢復細胞活力。所以我們將提取純化的正常小鼠肝臟線粒體與帕金森氏病模型細胞共同孵育，來研究其對帕金森氏病模型細胞的影響。
　　本研究分為三個部分：第一部分：分別用質(zhì)粒DsRed2-Mito和 ECFP-Mito轉(zhuǎn)染人肝癌細胞（HepG2），用以標

3、記線粒體。為得到穩(wěn)定表達的細胞株，又采用慢病毒轉(zhuǎn)染ECFP-Mito，再將穩(wěn)定表達的肝癌細胞中熒光標記的線粒體提取出來，并與SH-SY5Y細胞共孵育，在共聚焦顯微鏡下觀察，證明了外源線粒體可以進入SH-SY5Y細胞。第二部分：提取正常昆明小鼠肝臟的線粒體，激光粒度儀測定線粒體粒徑，用電子透射顯微鏡觀察線粒體的內(nèi)部構(gòu)造。并分別用詹姆斯綠 B和MitoTrackr Red CMXRos染色線粒體，在熒光顯微鏡和油鏡下觀察線粒體形態(tài)。運用線粒

4、體膜電位檢測探針 JC-1，以及不同濃度 CaCl2分別在熒光分光光度計和流式細胞儀下檢測提取純化的線粒體的膜電位以及膜完整性。第三部分：首先，用阿爾瑪藍檢測外源線粒體與正常SH-SY5Y細胞共孵育后細胞活力的變化以及細胞的生存曲線。再用MPP＋（常用于制備帕金森氏病細胞模型）處理SH-SY5Y細胞，構(gòu)建體外帕金森氏病細胞模型。再將小鼠肝臟線粒體與帕金森氏病的模型細胞共孵育，用阿爾瑪藍檢測到加入線粒體后細胞活力明顯增強，透射電鏡的結(jié)果顯