2，3-吲哚醌多靶點誘導腫瘤細胞SH-SY5Y凋亡機制的研究.pdf

1、目的：研究2，3-吲哚醌(2，3-dioxoindoline，isatin，ISA)誘導細胞凋亡的可能機制。 方法：體外培養(yǎng)人神經母細胞瘤細胞SH-SY5Y細胞，將SH-SY5Y細胞隨機分為對照組和ISA不同濃度(100、200、400μmol.L-1)處理組，采用熒光染色、DNA1adder分析細胞凋亡，RT-PCR及Western blotting等方法檢測不同濃度ISA作用后基因VEGF、bcl-2、bax、survivi

2、n及p53在mRNA和蛋白水平的變化，流式細胞術(flowcytometry，F(xiàn)CM)檢測Caspase-3蛋白水平的變化。 結果：(1) ISA（O、100、200、400μnol-L-1）作用SH-SY5Y細胞48 h后，在熒光顯微鏡下觀察到400μmol.L-1 ISA組細胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學改變：核染色質聚集、核碎裂、胞質濃縮，細胞凋亡核占(13.67±1.20)％，與對照組細胞凋亡核(0.67±0.33)％比較，差異

3、有顯著性（P<0.05）；瓊脂糖凝膠電泳顯示400μmol.L-1ISA處理組細胞出現(xiàn)明顯的梯狀條帶。(2) RT-PCR及Western blotting顯示：隨著ISA藥物濃度的增加，bcl-2 mRNA及蛋白表達、VEGFmRNA及蛋白表達、survivinmRNA及蛋白表達均逐漸減少（P<0.05）； bax mRNA及蛋白表達水平未見明顯變化(P>0.05)；而隨著ISA藥物濃度的增加，野生型p53mRNA及蛋白表達水平逐漸增

4、加（P<0.05）；并呈現(xiàn)濃度依賴關系。(3) FCM結果顯示隨著ISA藥物濃度的增加，活化Caspase-3的表達率分別為18.38％、26.93％、35.66％，明顯高于對照組(11.23％)（P<0.05）。 結論：本實驗顯示ISA能明顯誘導SH-SY5Y細胞凋亡，可能與ISA作用多個靶點有關，(1)降低VEGF的表達；(2)上調野生型p53表達水平，促進細胞核凋亡誘導途徑；(3)下調bcl-2表達水平，降低bcl-2/b