左卡尼汀通過線粒體途徑抑制H2O2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷的研究.pdf

1、目的：
　　復(fù)制過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷的阿爾茨海默氏病理模型，篩選并確定左卡尼汀（L-carnitine,LC）抑制SH-SY5Y細(xì)胞損傷的有效濃度，探究左卡尼汀通過線粒體途徑抑制H2O2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　方法：
　　根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將細(xì)胞隨機(jī)分為：對(duì)照組、H2O2（400μmol·L-1）模型組、左卡尼汀預(yù)處理組（50、100、200μmol·L-13h

2、預(yù)處理后進(jìn)行H2O2損傷）。MTT法觀察左卡尼汀對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞活性的影響；以酶活性檢測(cè)測(cè)定caspase3活性；JC-1為熒光探針，測(cè)定線粒體膜電位水平；以RT-PCR方法測(cè)定GRP75的mRNA轉(zhuǎn)錄水平；通過western-blot，檢測(cè)GRP75、細(xì)胞色素C以及Bax的蛋白表達(dá)；shRNA沉默GRP75。
　　結(jié)果：
　　以400μmol·L-1H2O2孵育SH-SY5Y細(xì)胞20min，復(fù)制SH-SY5Y細(xì)胞氧化損

3、傷模型。MTT實(shí)驗(yàn)中，H2O2組細(xì)胞存活率急劇下降，左卡尼汀預(yù)處理能有效提升細(xì)胞存活率，明顯緩解了H2O2造成的細(xì)胞損傷；caspase-3活性檢測(cè)顯示H2O2組caspase-3活性顯著提高，左卡尼汀處理組有效抑制了caspase-3的活性，表明左卡尼汀能抑制H2O2誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡；線粒體膜電位在H2O2損傷后顯著下降，左卡尼汀能保護(hù)受損的線粒體膜電位；RT-PCR結(jié)果顯示，H2O2組GRP75mRNA轉(zhuǎn)錄上升，左卡尼汀

4、處理后抑制了 GRP75mRNA轉(zhuǎn)錄；通過western-blot檢測(cè)胞漿中GRP78、細(xì)胞色素C、bax的蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)H2O2組以上三種蛋白均有顯著上升，左卡尼汀預(yù)處理可以有效降低GRP78、細(xì)胞色素C、bax的蛋白表達(dá)，起到抑制線粒體途徑凋亡的作用；GRP75 shRNA沉默時(shí)Bax表達(dá)受到抑制，提示Bax是GRP75的下游因子。
　　結(jié)論：
　　SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷誘導(dǎo)的阿爾茨海默氏病細(xì)胞模型中，左卡尼汀能有效