B細胞淋巴瘤Fab噬菌體抗體庫的構建、篩選及鑒定.pdf

1、目的：噬菌體抗體庫技術是應用基因克隆方法把全套抗體基因呈現在噬菌體表面，通過抗原的親和力選擇和噬菌體擴增獲得特異性抗體基因。利用該技術可制備出多種特異性單克隆抗體片段，包括Fab、SeFv、dsFv及diabody。本研究旨在運用噬菌體抗體庫技術構建針對B細胞淋巴瘤Raji細胞系噬菌體抗體庫并從中篩選出特異性的Fab抗體。 方法：以Raji淋巴瘤細胞免疫BALB/c小鼠，ELISA檢測抗血清滴度后，分離抗體陽性的小鼠脾淋巴細胞，

2、提取總RNA。利用RT-PCR擴增抗體輕鏈κ基因和重鏈Fd段，經SacI/XbaI和XhoI/SpeI雙酶切，依次克隆入噬菌體載體pComb3H-SS的相應酶切位點，并電轉化大腸桿菌XL1-Blue，以輔助噬菌體VCSM13進行超感染，構建B細胞淋巴瘤Raji細胞系Fab噬菌體抗體庫。將Raji細胞包被6孔板，對噬菌體抗體庫進行5輪“吸附—洗脫—擴增”富集篩選。隨機挑選最后一輪富集篩選的單克隆在大腸桿菌XL1-Blue中進行可溶性表達，