靶向膠質(zhì)瘤EGFRvⅢ核酸適配體-量子點成像體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：探究量子點（QDs）連接適配子（QD-Apt）靶向EGFRvIII膠質(zhì)瘤成像的方法與可行性。
　　方法：
　　1. QD-Apt的合成、物理學(xué)特征測定及安全性研究
　　1) QD-Apt的合成及物理學(xué)特征測定：生物素修飾的適配子（A32）與鏈霉親和素修飾的量子點（SA-QDs）通過生物素-鏈霉親和素鏈接將兩者結(jié)合形成QD-Apt。Zetasizer Nano ZS型納米粒度分析儀測定QD-Apt粒徑，熒光分光光度

2、計測定QD-Apt及QDs的吸收光譜和發(fā)射光譜。瓊脂糖凝膠電泳初步驗證適配子與量子點的連接。
　　2)安全性研究：體外采用CCK-8法檢測QD-Apt對HUVEC、U87和U87-EGFRvIII細(xì)胞活力的影響。體內(nèi)尾靜脈注射QD-Apt后，不同時間點測量裸鼠體重。HE染色觀察裸鼠各器官組織的病理變化。
　　2. QD-Apt在體外的靶向熒光標(biāo)記
　　1) EGFRvIII在細(xì)胞株中的表達(dá)：逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）

3、、western blot和細(xì)胞免疫熒光方法檢測 HUVEC、U87、U87-EGFRvIII細(xì)胞ERFRvIII的表達(dá)。
　　2) QD-Apt靶向膠質(zhì)瘤細(xì)胞株的研究：QD-Apt標(biāo)記 HUVEC、U87、U87-EGFRvIII細(xì)胞，并在激光共聚焦下觀察熒光強(qiáng)度。流式細(xì)胞術(shù)檢測QD-Apt對HUVEC、U87、U87-EGFRvIII細(xì)胞的標(biāo)記率。
　　3. QD-Apt在裸鼠體內(nèi)成像及組織分布：
　　建立裸鼠顱內(nèi)

4、膠質(zhì)瘤模型并用MRI檢測腫瘤生長情況。4周后，尾靜脈注射QD-Apt及QDs，6小時后進(jìn)行活體成像。并取瘤組織及正常腦組織行冰凍切片并在激光共聚焦下觀察；分光光度計測定各組織器官的熒光強(qiáng)度。
　　結(jié)果：
　　1.成功構(gòu)建QD-Apt納米探針，QD-Apt及QDs的粒徑均為20nm左右，QDs與A32連接后，其最大發(fā)射光譜仍為605±5nm，吸收光譜波峰仍為330nm。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明，適配子與量子點連接成功。體內(nèi)外的安

5、全性研究均證實QD-Apt無明顯毒性。
　　2. EGFRvIII在U87-EGFRvIII細(xì)胞中為陽性表達(dá)，而在U87、HUVEC中均為陰性表達(dá)。QD-Apt可特異性的結(jié)合U87-EGFRvIII膠質(zhì)瘤細(xì)胞株并且標(biāo)記率高達(dá)81.53%。
　　3.活體熒光成像顯示，QD-Apt可以透過血腦屏障并通過特異性結(jié)合EGFRvIII而選擇性地聚集在腫瘤組織中。與正常腦組織相比，腫瘤組織中具有很強(qiáng)的熒光信號，可以清晰地顯示出腫瘤的邊界