葉酸修飾PAMAM樹(shù)形分子介導(dǎo)靶向惡性腦膠質(zhì)瘤基因轉(zhuǎn)染及體內(nèi)外腦瘤抑制研究.pdf

1、本文以碳二亞胺偶合法合成了葉酸改性的PAMAM樹(shù)形分子(FA-PAMAM)，以PAMAM和FA-PAMAM為載體，凝膠電泳法研究表明樹(shù)形分子與ODN配比(N/P)應(yīng)大于16:1，透射電鏡研究觀察表明ODN與PAMAM及其衍生物靜電復(fù)合后對(duì)粒徑影響較小，粒徑在50～80nm，適合于體內(nèi)外基因轉(zhuǎn)染的要求。 以U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞為模型研究了PAMAM載體對(duì)ASODN的轉(zhuǎn)染效果，并與oligofectamin進(jìn)行了對(duì)比。動(dòng)態(tài)熒光顯微鏡觀

2、察顯示PAMAM對(duì)ASODN的瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)染明顯優(yōu)于oligofectamin。以RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞EGFR的mRNA水平表達(dá)，以細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)EGFR蛋白表達(dá)，進(jìn)一步證明了PAMAM對(duì)ASDON優(yōu)良的轉(zhuǎn)染效果。以MTT法檢測(cè)細(xì)胞增值，證明PAMAM具有一定的細(xì)胞毒性，但與oligofectamine毒性相當(dāng)，并且PAMAM/ASODN復(fù)合物的毒性隨N/P比的增大而增大。 以C6鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞系體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究FA-PAMAM靶向惡

3、性腦膠質(zhì)瘤的ASODN基因轉(zhuǎn)染與腫瘤抑制。流式細(xì)胞儀測(cè)定體外轉(zhuǎn)染率顯示FA-PAMAM/ODN組具有97.36％的高轉(zhuǎn)染率。體內(nèi)外細(xì)胞對(duì)照實(shí)驗(yàn)證明經(jīng)ASODN基因治療后C6鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲能力顯著降低，凋亡細(xì)胞數(shù)顯著上升，并且FA-PAMAM/ASODN優(yōu)于PAMAM/ASODN組，與oligofectamine/ASODN組差異顯著，證明了FA-PAMAM的腫瘤靶向作用。 靜脈注射熒光標(biāo)記的FA—PAMAM/ODN、P