濃縮血小板復(fù)合功能紗布的研制.pdf

1、近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)血小板除具有止血作用外，在創(chuàng)傷修復(fù)和再生領(lǐng)域也發(fā)揮著重要的作用。富血小板血漿(Platelet-rich Plasma，PRP)作為血小板的常規(guī)應(yīng)用形式，因其富含高濃度的復(fù)合生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子等生物活性分子，廣泛用于組織工程和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。但是PRP的主要形式是以液體存在，單獨(dú)運(yùn)用有一定局限性，通過將其負(fù)載在生物材料上，可以更好的應(yīng)用在創(chuàng)面發(fā)揮止血愈創(chuàng)作用。
　　羧甲基殼聚糖是殼聚糖經(jīng)羧甲基化后的衍生物，

2、因?yàn)槠淞己玫乃苄?，?guī)避了殼聚糖用稀酸作為溶劑的弊端，此外，其分子中含有羥基和氨基，可與多種功能活性物質(zhì)結(jié)合，充當(dāng)其載體，從而使其得到廣泛的應(yīng)用和深入的研究。PRP是否能與其聯(lián)合應(yīng)用，國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道。本研究將從以下幾個(gè)方面研究負(fù)載濃縮血小板紗布的制備工藝并對(duì)其進(jìn)行初步功能評(píng)價(jià)。
　　本研究中，我們以臨床上常用的可吸收性止血紗布為基礎(chǔ)，篩選出合適的原料為殼聚糖類，出于溶解性和降解周期的考慮，我們不用殼聚糖而選擇將羧甲基殼聚糖作為本課

3、題制備功能性紗布的原材料，然后將其與富血小板血漿復(fù)合，設(shè)計(jì)不同梯度的濃度、溫度及混合比例等條件，對(duì)該負(fù)載濃縮血小板的可吸收性紗布的制備條件進(jìn)行探究。為證明其有效性，本研究進(jìn)一步從促細(xì)胞增殖、動(dòng)物急性創(chuàng)傷修復(fù)和外傷止血等幾個(gè)層面對(duì)其功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　一.復(fù)合紗布制備材料的篩選
　　以臨床上常用的可吸收性止血紗布為基礎(chǔ)，選取臨床上常用的幾種代表性的紗布。制備濃縮血小板，并對(duì)其進(jìn)行凍干前的預(yù)處理。然后在各組紗布的表面滴加制備好的

4、濃縮血小板，并經(jīng)過預(yù)凍、凍干等程序。然后對(duì)凍干后的材料進(jìn)行復(fù)溶，測(cè)量其pH值并加入相應(yīng)的激活劑，觀察凝膠的的形成情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組復(fù)合凍干品質(zhì)地均呈現(xiàn)硬而脆，且只有殼聚糖類的復(fù)合凍干品能夠形成血小板凝膠，其余材料均呈現(xiàn)不同程度的酸性，未見凝膠形成。
　　二.羧甲基殼聚糖/濃縮血小板復(fù)合凍干品制備條件的探究
　　設(shè)計(jì)不同殼聚糖濃度、預(yù)凍溫度和CC/PRP共混比例等條件，制備CC/PRP復(fù)合凍干品，并對(duì)其進(jìn)行肉眼觀和掃描電鏡觀

5、察，抗壓縮性能及所負(fù)載生長(zhǎng)因子含量等進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2-3％的殼聚糖溶液濃度，預(yù)凍溫度為-80℃，CC/PRP按1∶1共混比例混合時(shí)，所制備出的復(fù)合凍干品具有較好的抗壓縮性能，且負(fù)載的生長(zhǎng)因子含量較高。
　　三.CC/PRP可吸收復(fù)合材料對(duì)HUVEC促增殖功能的研究
　　將不同CC、PRP共混比例制備的新型可吸收性復(fù)合血小板功能材料用基礎(chǔ)培養(yǎng)基浸提48h后，用凝血酶-葡萄酸鈣溶液激活，用其浸提上清作用于HUVEC，檢測(cè)復(fù)

6、合功能材料對(duì)HUVEC的促增值效果。研究發(fā)現(xiàn)，不同共混比例的復(fù)合功能材料均具有促進(jìn)細(xì)胞增殖效果，且相同條件下，2％(wt/vol)濃度CC共混的復(fù)合材料，促增殖效果更好。
　　四.CC/PRP可吸收復(fù)合材料促進(jìn)小鼠皮膚全層缺損模型的研究
　　前面的研究，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)復(fù)合止血紗布上已經(jīng)成功負(fù)載了較高濃度的生長(zhǎng)因子，并且具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。為進(jìn)一步證明其促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)的能力，通過建立小鼠皮膚全層缺損模型，將48只小鼠隨機(jī)分為4

7、組（空白組、CC/PRP組、CC組和FDP組），觀察其促創(chuàng)面修復(fù)效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)早期，CC/PRP組、CC組、FDP組均具有較高的促進(jìn)創(chuàng)面愈合率，均明顯高于空白對(duì)照組。病理切片檢查提示，制備的復(fù)合材料具有縮短創(chuàng)傷炎癥期，加速傷口上皮化和創(chuàng)面愈合率、促進(jìn)血管新生和膠原纖維的沉積與成熟等。由此可見，其具有明顯的促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用。
　　五.CC/PRP可吸收復(fù)合材料對(duì)新西蘭白兔耳動(dòng)脈出血的止血作用研究
　　32只新西蘭白兔隨

8、機(jī)分為4組（空白組、CC/PRP組、CC組和FDP組），建立了新西蘭白兔耳動(dòng)脈出血模型，觀察所制備的復(fù)合CC/PRP對(duì)外傷性動(dòng)脈出血的止血作用，并與FDP、CC進(jìn)行比較。結(jié)果表明，CC/PRP、CC、FDP均具有一定的止血作用，且與單獨(dú)使用CC、FDP相比，兩者聯(lián)合制備的CC/PRP具有更顯著的止血效果。
　　綜上所述，本研究制備的CC/PRP可吸收復(fù)合功能性紗布，成功負(fù)載了生物活性分子，具有促進(jìn)止血和創(chuàng)傷愈合作用，有望作為一種新