多功能脂質(zhì)體構(gòu)建微針陣列疫苗佐劑-雙傳遞系統(tǒng).pdf

1、為發(fā)展有效的粘膜疫苗，本研究采用兩種類型的多功能脂質(zhì)體，一種為粒徑為200nm的甘露糖化脂質(zhì) A-脂質(zhì)體（MLLs）和另一種粒徑為50nm的隱形脂質(zhì)A-脂質(zhì)體（SLLs），兩者均裝載有模型抗原（OVA）及碳酸氫銨，并且組合在一起構(gòu)建包含pro-SLLs/MLLs微針陣列（proSMMA）。研究表明，proSMMA再水化后迅速溶解，釋放初始 MLLs和 SLLs。進(jìn)一步的研究證明在陰道粘膜接種proSMMA后，再次釋放的 MLLs主要被陰

2、道粘膜抗原提呈細(xì)胞所攝取，而 SLLs則直接轉(zhuǎn)運(yùn)至引流淋巴結(jié)，被其中的抗原提呈細(xì)胞所攝取。此外，SLLs/MLLs能夠促進(jìn)抗原產(chǎn)生溶酶體逃逸，從而有望通過APCs（抗原提呈細(xì)胞）表面的MHC-I途徑將抗原交叉提呈至淋巴細(xì)胞。產(chǎn)生溶酶體逃逸現(xiàn)象是由于溶酶體酸化脂質(zhì)體使其釋放NH4HCO3而生成CO2和NH4+/NH3再通過氣體膨脹使得溶酶體破裂。體內(nèi)追蹤實(shí)驗(yàn)表明，SLLs將運(yùn)載疫苗傳遞至淋巴結(jié) APCs，而 MLLs將運(yùn)載疫苗傳遞至接種粘

3、膜APCs。因此，proSMMA實(shí)際上是疫苗佐劑-雙遞送系統(tǒng)，有望能夠誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答以預(yù)防通過性傳播的病原體。
　　本次實(shí)驗(yàn)以卵清白蛋白（Ovalbumin,OVA）為模型抗原，將OVA和碳酸氫銨共同裝封在多功能脂質(zhì)體中構(gòu)建微針疫苗佐劑-雙遞送系統(tǒng)。結(jié)合微針給藥機(jī)制，開展其作為經(jīng)粘膜途徑接種的疫苗遞送系統(tǒng)。研究脂質(zhì)體微針的制備及表征和多功能脂質(zhì)體促進(jìn)APCs對(duì)抗原的攝取，以及研究多功能脂質(zhì)體對(duì)APCs功能影響及其部分機(jī)制等

4、。通過分析脂質(zhì)體微針經(jīng)粘膜免疫應(yīng)答特點(diǎn)，初步闡明其免疫應(yīng)答效果。本研究主要分為兩個(gè)部分，下面將對(duì)此兩部分內(nèi)容進(jìn)行簡述。
　　第一部分：不同類型多功能脂質(zhì)體微針陣列的構(gòu)建及其表征。脂質(zhì)體的制備方法分很多種，我們采用薄膜分散法成功制備了兩種多功能脂質(zhì)體SLLs和MLLs，并且同微針基質(zhì)相關(guān)物質(zhì)混合通過微針模具成功制備了微針陣列。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中為追蹤脂質(zhì)體在體內(nèi)及細(xì)胞內(nèi)的趨向，還制備了裝載熒光染料鈣黃綠素和磺酰羅丹明B（SRB）的脂質(zhì)體。