功能性膜材料及其構(gòu)建的脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物載體的研究.pdf

1、目的：本課題以高效低毒的腫瘤靶向治療為目的，通過合成功能性多肽和葉酸修飾的材料，構(gòu)建新型脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)，包載抗腫瘤藥物后對其進行表征，并考察其對四種人腫瘤細胞株的靶向性及體外藥效，為將來采用智能性新材料進行腫瘤治療提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法：（1）功能性材料的合成及表征：通過固相合成法合成具有pH敏感性的多肽GALA-硬脂酸（GALA-SA），酶敏感多肽MCP；利用固相合成法及化學(xué)合成法合成葉酸-聚乙二醇3500-磷脂酰乙

2、醇胺（Folate-PEG3500-DSPE），并采用C4色譜柱和高效液相色譜法（HPLC）對其進行純度檢查，采用質(zhì)譜法（MS）表征其分子量。（2）新型脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)的構(gòu)建：1)以5-羧基熒光素為模型藥，以粒徑、分散系數(shù)及包封率為考察指標(biāo)，對逆相蒸發(fā)法和成膜水化法進行比較，優(yōu)選脂質(zhì)體的制備方法；2）以優(yōu)選出的脂質(zhì)體制備方法，分別制備 PEG化脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)、葉酸（Folate）-PEG-脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)以及pH敏感多肽-PEG-脂質(zhì)體遞藥

3、系統(tǒng)，并分別包載5-羧基熒光素(FAM）和抗腫瘤藥物阿霉素(DOX），構(gòu)建Folate-PEG3500-脂質(zhì)體/阿霉素(FA-P-LS/DOX）、Folate-PEG3500-脂質(zhì)體/5-羧基熒光素（FA-P-LS/FAM）和GALA-脂質(zhì)體/5-羧基熒光素（G-LS/FAM）；3）對已構(gòu)建的脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)進行質(zhì)量研究，分別以粒徑、外觀形態(tài)及包封率對 Folate-PEG3500-脂質(zhì)體/阿霉素（FA-P-LS/DOX）進行評價；以粒徑

4、及包封率對Folate-PEG3500-脂質(zhì)體/5-羧基熒光素（FA-P-LS/FAM）進行評價；以粒徑及透析法對pH敏感載5-羧基熒光素脂質(zhì)體（G-LS/FAM）進行評價。（3）葉酸修飾脂質(zhì)體的體外靶向性及藥效學(xué)初步研究：將四株人腫瘤細胞[乳腺癌細胞（MDA-MB-231）、宮頸癌細胞（HeLa）、人口腔上皮癌細胞（KB）和胃癌細胞（SGC）]分別與構(gòu)建的脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)共培養(yǎng)，采用熒光顯微鏡法定性分別考察其對FA-P-LS/FAM的攝

5、取能力；并通過細胞增殖-毒性檢測試劑盒CCK-8分別考察FA-P-LS/DOX對上述細胞的24、48和72小時的抑制率，并與普通脂質(zhì)體和游離藥物比較體外藥效學(xué)。
　　結(jié)果：（1）采用固相合成技術(shù)成功合成具有pH敏感性多肽GALA（具有30個氨基酸），并在末端連接SA；合成了酶敏感多肽MCP（具有14個氨基酸）及葉酸-半光氨酸（Folate-Cys）,利用雙功能PEG合成得到了功能性脂質(zhì)體膜材料料Folate-PEG3500-DSP

6、E，HPLC和ESI-MS結(jié)果證明所有合成產(chǎn)品的純度和分子量均符合要求。（2）各脂質(zhì)體的遞藥系統(tǒng)的構(gòu)建及表征。對兩種制備方法的考察結(jié)果得出，逆相蒸發(fā)法優(yōu)于成膜水化法；通過采用優(yōu)選的逆相蒸發(fā)-擠壓過膜的方法，分別制備了包封阿霉素（Doxorubicin，DOX）、5-羧基熒光素（FAM）的普通脂質(zhì)體、PEG化脂質(zhì)體、葉酸修飾的PEG化脂質(zhì)體和pH敏感脂質(zhì)體。各種脂質(zhì)體粒徑均在100nm左右，分布均勻，外觀圓整。葉酸的修飾對脂質(zhì)體的粒徑、外

7、觀、包封率等性質(zhì)均無明顯影響。（3）四株腫瘤細胞的定性攝取試驗結(jié)果表明，相對普通脂質(zhì)體而言，有葉酸主動靶頭修飾的FA-P-LS/FAM對葉酸受體表達的腫瘤細胞具有更好的靶向性。采用CCK-8法測定游離DOX、LS/DOX和FA-P-LS/DOX體外抗這四株人腫瘤細胞生長抑制實驗結(jié)果表明，葉酸修飾的阿霉素脂質(zhì)體的體外藥效均比普通脂質(zhì)體有不同程度的增加。
　　結(jié)論：采用本文合成的多種功能性膜材料構(gòu)建的新型脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng)，具有良好的粒徑