光譜法和色譜法測定植物樣品中巰基化合物的研究.pdf

1、半胱氨酸和含半胱氨酸殘基的巰基化合物（以下簡稱巰基化合物）在生物體內(nèi)具有重要的生物學(xué)功能，大多分布在植物細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。巰基化合物，像 GSH和Cys等，在機(jī)體內(nèi)的含量是重要的健康因子。研究表明；機(jī)體衰老和特定的疾病會降低整體巰基化合物的含量分布。因此，通過篩選富含巰基化合物的藥食兩用植物作為外源性補充劑來提高機(jī)體巰基化合物的含量分布是防病、治病、延年益壽的重要途徑之一。迄今，盡管有許多測定植物樣品中的巰基化合物的測定方法的報道，但前處理方法

2、和測定方法的不同導(dǎo)致測定結(jié)果有較大差異，同時也有因所選方法不當(dāng)引起的漏檢導(dǎo)致許多樣品尚缺少巰基化合物含量測定的分析數(shù)據(jù)[2-3]。這對篩選富含巰基化合物的藥食兩用植物及其生物功能成分的評價帶來較多的困難。本研究選擇用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步衍生化的前處理方法，采用高效液相色譜法和光譜法測定了蓮子和枳椇子巰基化合物，同時對方法學(xué)和前處理過程對測定的影響一并進(jìn)行了探討。本研究篩選富含巰基化合物的藥食兩用植物的篩選及其應(yīng)用、巰基化合物在特

3、定植物中的生物學(xué)功能的評價都具有實際意義。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用DTNB為衍生化試劑，采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步衍生化前處理方法，測定了蓮子中GSH和總巰基（-SH）的含量。迄今，利用DTNB柱前衍生化HPLC法測定GSH等小分子巰基化合物含量有許多文獻(xiàn)報道，但測定總巰基含量鮮見有報道。這是因為與總巰基含量信息有關(guān)的衍生化產(chǎn)物TNBA在色譜測定過程中易發(fā)生化學(xué)變性導(dǎo)致的色譜峰拖尾,導(dǎo)致不能對總巰基含量進(jìn)行準(zhǔn)確的定量

4、分析。本研究中，通過改變流動相的酸度和相對極性的方法采用梯度洗脫的方法，對色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，成功消除了色譜拖尾、準(zhǔn)確測定了蓮子中的總巰基含量。測定結(jié)果表明；蓮子中 GS H和總巰基的含量分別為0.9711μmol/g和1.3686μmol/g是一種富含巰基化合物的藥食兩用植物。⑵采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步衍生化的前處理方法，利用DTNB衍生化UV-Vis分光光度法和OPA衍生化熒光分光光度法測定了蓮子中總巰基和GSH含量。蓮子中

5、 GSH的含量為0.9443-0.9576μmol/g；總巰基的含量為1.3267-1.3452μmol/g。測定結(jié)果與 HPLC法測定結(jié)果進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn)兩者結(jié)果基本吻合。⑶利用衍生化試劑4,4′-二硫代聯(lián)吡啶（4-DP S）和鄰苯二甲醛(OPA)分別采用UV-Vis分光光度法和熒光分光光度法測定枳椇子中 GSH和總巰基的含量。枳椇子中總巰基和 GSH含量分別為0.08401-0.08582μmo l/g和2.391-2.462μmo l