光譜法和色譜法測(cè)定植物樣品中巰基化合物的研究.pdf

1、半胱氨酸和含半胱氨酸殘基的巰基化合物（以下簡(jiǎn)稱巰基化合物）在生物體內(nèi)具有重要的生物學(xué)功能，大多分布在植物細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。巰基化合物，像 GSH和Cys等，在機(jī)體內(nèi)的含量是重要的健康因子。研究表明；機(jī)體衰老和特定的疾病會(huì)降低整體巰基化合物的含量分布。因此，通過(guò)篩選富含巰基化合物的藥食兩用植物作為外源性補(bǔ)充劑來(lái)提高機(jī)體巰基化合物的含量分布是防病、治病、延年益壽的重要途徑之一。迄今，盡管有許多測(cè)定植物樣品中的巰基化合物的測(cè)定方法的報(bào)道，但前處理方法

2、和測(cè)定方法的不同導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果有較大差異，同時(shí)也有因所選方法不當(dāng)引起的漏檢導(dǎo)致許多樣品尚缺少巰基化合物含量測(cè)定的分析數(shù)據(jù)[2-3]。這對(duì)篩選富含巰基化合物的藥食兩用植物及其生物功能成分的評(píng)價(jià)帶來(lái)較多的困難。本研究選擇用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步衍生化的前處理方法，采用高效液相色譜法和光譜法測(cè)定了蓮子和枳椇子巰基化合物，同時(shí)對(duì)方法學(xué)和前處理過(guò)程對(duì)測(cè)定的影響一并進(jìn)行了探討。本研究篩選富含巰基化合物的藥食兩用植物的篩選及其應(yīng)用、巰基化合物在特

3、定植物中的生物學(xué)功能的評(píng)價(jià)都具有實(shí)際意義。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用DTNB為衍生化試劑，采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步衍生化前處理方法，測(cè)定了蓮子中GSH和總巰基（-SH）的含量。迄今，利用DTNB柱前衍生化HPLC法測(cè)定GSH等小分子巰基化合物含量有許多文獻(xiàn)報(bào)道，但測(cè)定總巰基含量鮮見(jiàn)有報(bào)道。這是因?yàn)榕c總巰基含量信息有關(guān)的衍生化產(chǎn)物TNBA在色譜測(cè)定過(guò)程中易發(fā)生化學(xué)變性導(dǎo)致的色譜峰拖尾,導(dǎo)致不能對(duì)總巰基含量進(jìn)行準(zhǔn)確的定量

4、分析。本研究中，通過(guò)改變流動(dòng)相的酸度和相對(duì)極性的方法采用梯度洗脫的方法，對(duì)色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，成功消除了色譜拖尾、準(zhǔn)確測(cè)定了蓮子中的總巰基含量。測(cè)定結(jié)果表明；蓮子中 GS H和總巰基的含量分別為0.9711μmol/g和1.3686μmol/g是一種富含巰基化合物的藥食兩用植物。⑵采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步衍生化的前處理方法，利用DTNB衍生化UV-Vis分光光度法和OPA衍生化熒光分光光度法測(cè)定了蓮子中總巰基和GSH含量。蓮子中

5、 GSH的含量為0.9443-0.9576μmol/g；總巰基的含量為1.3267-1.3452μmol/g。測(cè)定結(jié)果與 HPLC法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)兩者結(jié)果基本吻合。⑶利用衍生化試劑4,4′-二硫代聯(lián)吡啶（4-DP S）和鄰苯二甲醛(OPA)分別采用UV-Vis分光光度法和熒光分光光度法測(cè)定枳椇子中 GSH和總巰基的含量。枳椇子中總巰基和 GSH含量分別為0.08401-0.08582μmo l/g和2.391-2.462μmo l